الفهرس يوجد فقط 14 صفحة متاحة للعرض العام
 |  | from | 139 |  |  |
| | | from | 139 | | |
المستخلص
(الانتخاب لنشاط انزيم السليوليز في الشيزوفيللم كوميوني)
تستخدم انزيمات السليوليز علي نطاق واسع في المجالات الصناعية و في انتاج الغذاء الحيواني و لتحويل الكتلة الحيوية الي سكريات قابلة للتخمر بغرض الحصول علي الوقود الحيوي كبديل متجدد للبترول و تستخدم ايضا في حل مشكلة التلوث البيئي (الناتجة من حرق المخلفات السليولوزية المتراكمة) لذلك فان البحث الحالي تم اجراؤه لانتخاب سلالات متميزة من الفطر البازيدي شيزوفيللم كوميوني بالنسبة لانتاجية انزيم السليوليز و قد تم اجراء هذا البحث طبقا لما يلي:
اولا: التمييز بين احدي عشر سلالة من سلالات الفطر البازيدي الشيزوفيللم كوميوني التي تم تجميعها من مناطق جغرافية مختلفة (السويد - ألمانيا - استراليا – التشيك ) وقد تم هذا التمييز عن طريق:
1 - اجراء دراسة لبعض الصفات المورفولوجية التي شملت:-
قياس معدل النمو و التعرف علي نشاط إنزيم السليوليز.
قياس الفترة الزمنية اللازمة لتكوين الجسم الثمري.
حصر عدد الأجسام الثمرية المتكونة لكل سلالة.
و يمكن تلخيص نتائج هذه الدراسة المورفولوجية كما يلي:
تم قياس معدل النمو بتنمية السلالات المختلفة علي نوعين من البيئات الأولى : البيئة المتكاملة (CM) و الثانية: البيئة الانتخابية الكاشفة عن نشاط انزيم السليوليز.
وقد أظهرت النتائج وجود فروق معنوية جدا في معدل النمو بين السلالات المختلفة عند استخدام البيئة المتكاملة و البيئة الانتخابية، و قد أشارت النتائج ايضا الي وجود ارتباط عالي المعنويه بين المعدل العالي للنمو علي البيئة الانتخابية وزيادة النشاط الإنزيمي و كانت العلاقة طردية بين هاتين الصفتين. كما أن السلالة Oe.2 اظهرت تميز في معدل نموها العالي سواء كانت البيئة متكاملة أو انتخابية بالاضافة الي انها تميزت في انتاجية الانزيم.
وعند دراسة الفترة الزمنية اللازمة لتكوين الأجسام الثمرية فقد دلت النتائج بوضوح علي وجود فروق معنوية جدا بين السلالات المختلفة من الشيزوفيللم في هذه الصفة، كما ثبت ان السلالاتِAu , Er , Zv , Sw.1, Sw.2 قد فقدت قدرتها تماما علي تكوين الأجسام الثمرية و يمكن تعليل ذلك باي من الاسباب التالية او بمجملها: الاختلاف في الخلفية الوراثية لاختلاف مصدرها – عدم توفر الظروف البيئة الملائمة لتكوين الجسم الثمري بها – الحاجة لفترة زمنية اطول لتكوين الحسم الثمري، كما برهنت النتائج ايضا علي ان السلالات Wn 2, .Bo.2 , Oe كانت أسرع السلالات في تكوين الأجسام الثمرية.
عند دراسة عدد الأجسام الثمرية التي تتكون بالنسبة لكل سلاله فقد اتضح من النتائج وجود فروق عالية المعنوية بين السلالات المختلفة بالنسبة لهذه الصفه و يرجع ذلك لوجود الخمس سلالات التي فقدت قدرتها علي تكوين الاجسام الثمرية كما ذكر من قبل. من ناحية أخري فقد اشارت النتائج الي ان السلالتين Oe.2, Bn قد تميزا بتكوين عدد أكبر من الأجسام الثمرية بالنسبة للسلالات الآخري التي كونت اجسام ثمرية.
2 - اجراء دراسة لتقييم السلالات المختلفة من الشيروفيللم كوميوني علي المستوي الجزيئي باستخدام تحليل الـ RAPD- PCR.
استخدم في هذه الدراسة خمس بادئات مختلفة يرمز لها بالرموز OPY-5, OP1-9 , OPM-3 OPW-15, OPS-19 وقد أظهرت النتائج عدم وجود ارتباط بين درجة التماثل الوراثي ومنشأ السلالة التي جمعت منه فعلي سبيل المثال بلغت درجة التماثل 34% بين السلالتين Sw.2 , Oe.2 حيث الأولي معزولة من ألمانيا والثانية من السويد. في حين بلغت درجة التماثل 87.7% بين السلالتين Sw.1 , Er حيث ان الأولى معزولة من السويد والثانية من المانيا.
ثانيا: كان الهدف الرئيسي الثاني للبحث الجاري هو تصميم برنامج انتخابي يمكن بواسطتة الحصول علي سلالات من الشيزوفيللم تتفوق في نشاطها الانزيمي و الوصول الي سلالات جديدة عالية الانتاجية و قد اشتمل هذا البرنامج علي نوعين مختلفين من طرق الانتخاب للوصول للهدف المرغوب:
1- الانتخاب علي مستوي الطور الثنائي النواة Dikaryon) )
2- الانتخاب علي مستوي الطور الأحادي النواة Monokaryon) ).
و قد شملت هذه الطريقة من الانتخاب وسيلتين:
أ- ان يكون الانتخاب داخل السلاله .
ب- ان يكون الانتخاب بين السلالات.
وقد تم الانتخاب علي مستوي الطور الثنائي عن طريق اختيار أفضل ثلاثة سلالات ثنائية في نشاط إنزيم السليوليز والتي أشير إليها بالرموز Wn , Bn , Oe.2 وتم عزل عدد من الجراثيم البازيدية من كل سلالة ثم عمل التهجينات المختلفة بين الجراثيم التابعة للسلالات الثلاثة ثم اختيار أفضل ثلاثة سلالات في إنتاجية السليوليز بعد تكوين الطور الثنائي .
أما في حالة الانتخاب علي مستوي الطور الأحادي داخل السلالة فأنه يتم عزل جراثيم بازيدية ويتم تنميتها للحصول علي سلالات أحادية النواة تم اختيار أفضلها بالنسبة لإنتاجية الإنزيم ويتم التهجين بين السلالات الأحادية المتميزة في الانتاجية الناتجة من إنبات الجراثيم وتعاد الدورة الانتخابية مرة أخري .
أما الطريقة الثالثة للانتخاب فهي تمثل الانتخاب علي مستوي الجراثيم الأحادية والتي تنتخب لصفة النشاط الأنزيمي حيث تم اختيار افضل ثلاث سلالات في الانتاجية (Wn , Bn , Oe.2 ) ثم تم عزل جراثيم من كل سلالة و تنميتها للحصول علي الطور الحادي ثم يتم اختيار أفضلها في إنتاجية الأنزيم ليتم التهجين فيما بينها لكي يتم الحصول علي أفضل طور ثنائي لإنتاج الإنزيم .
هذا و يمكن تلخيص نتائج الانتخاب كما يلي:
اشارت النتائج لبرامج الانتخاب الي فاعلية الانتخاب علي مستوي الطور ثنائي النواة وذلك عند اجراء دورة واحدة لانتخاب سلالات متميزة في نشاطها الانزيمي، في حين ثبت عدم فاعاية الانتخاب عند اجراء دورة اخري اضافية حيث انها قد تؤدي الي سلالات اقل انتاجية.
من ناحية اخري اوضحت نتائج الانتخاب علي مستوي الطور احادي النواة (سواء داخل السلالة الواحدة او بين سلالات) انة يمكن الحصول علي احاديات النواة متميزة عن آبائها في نشاطها الانزيمي و كان الفارق بينهم عالي المعنوية.
كما اوضحت النتائج ايضا عدم امكانية الحصول علي ثنائيات النواة متميزة عن آبائها في انتاجيتها للسليوليز في حالة الانتخاب علي المستوي الاحادي (داخل السلالة) سواء كان ذلك في الدورة الاولي او الثانية و قد يرجع ذلك بسبب تأثير التربية الداخلية.
اما في حالة الانتخاب بين السلالات فقد امكن الحصول علي ثنائيات متميزة الانتاجية عن آبائها و ذلك في الدورة الاولي للانتخاب بينما لم يتم الحصول علي مثل هذه الثنائيات في الدورة الثانية للانتخاب مما يعني ان الدورة الاولي تكفي للحصول علي ثنائيات النواة متميزة الانتاجية.
و يمكن ان نستخلص من هذه النتائج ان الكشف عن الاختلافات المورفولوجية و الجزيئية بين سلالات الفطر البازيدي الشيزوفيللم كوميوني قد يكون له اثر فعال في تحديد السلالات المنتجة للانزيم محل الدراسة كما ان اجراء مثل هذه البرامج من الانتخاب قد يفيد في انتخاب و تمييز سلالات متميزة في انتاجيتها للانزيم الي جانب الطرق التقليدية الاخري في الانتخاب مثل الطفرة – ادماج البروتوبلازم – النقل الجيني و التحول حيث ان طريقة الانتخاب المتبعه في البحث الجاري لا تحتاج الي امكانيات معملية غير ميسرة.