الفهرس 
ReviewOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 164 |  |  |
| | | from | 164 | | |
Abstract
أجريت هذه الدراسة كمحاولة لإيجاد أفضل برنامج تحصيني والذي يمكن به مقاومة مرض البروسيلا في مصر خاصة البروسيلا مليتنسيس والتي أصبحت تمثل السبب الرئيسي للبروسيلا في مصر ويكون آمنا ويحقق أعلى درجة من المناعة مع أقل السلبيات لذلك تم تحضير الفلاجيلين من والجرعات المختلفة من لقاح ريف(1) الحي في بداية هذه الدراسة تم فحص الصفات البكتيرولوجية المختلفة الخاصة بالعترات المستخدمة في البحث وهي عترة ريف(1) والعترة الضارية Brucella melitensis16M.
تم إنماء عترة ريف(1) في وسط التريبتوز آجار والذي يحتوي على 10% سيرم عجول ومن ثم تجميع الخلايا وتجفيدها لتحضير لقاح الريف(1) عند العد البكتيري 1-2× 910مستعمرة حية للجرعة الواحدة وتم معايرتها حيث تم إجراء اختبار النقاوة والأمان والكفاءة والقوة المناعية للقاح الريف (1) المحضرمحليا على خنازير غينيا وكانت النتائج مطابقة للمواصفات العالمية.
حيث اشتملت هذه الدراسة على إجراء تجارب أولية على الفئران السويسري ثم طبقت التجارب بعد ذلك على الأغنام .
أولا: في التجارب الأولية تم حقن مجموعة من الفئران السويسري حيث أن عدد الفئران الكلي لهذه الدراسة (200) فأر سويسري مقسمة الى خمس مجاميع كل مجموعة 40 فأر وتم تحصينها كالآتي:
1-مجموعة(1): تم تحصينها باستخدام الجرعة الكلية من لقاح ريف (1) المحضر محليا فقط باستخدام الحقن تحت الجلد حيث أن الجرعة الكلية ( 1×10 8 ) مستعمرة حية .
2-مجموعة(2): تم تحصينها باستخدام الفلاجيلين المحضر محليا من العترة الضارية Brucella melitensis16M ثلاث جرعات متتالية على مدار ثلاث أسابيع متتابعة عن طريق الفم حيث أن الجرعة الواحدة 40 ميكروجرام من الفلاجيلين.
3-مجموعة(3): تم تحصينها باستخدام الجرعة المختزلة (المخفضة) من لقاح ريف(1) الحي المحضر محليا ( 1×10 6 ) مستعمرة حية بالإضافة إلي الفلاجيلين 40 ميكروجرام ثلاث جرعات متتالية على مدار ثلاث أسابيع متتابعة عن طريق الفم .
4- مجموعة(4): تم تحصينها باستخدام الجرعة الكلية من لقاح ريف (1) المحضر محليا باستخدام الحقن تحت الجلد حيث أن الجرعة الكلية( 1×10 8 ) مستعمرة حية بالإضافة إلى الفلاجيلين تحت الجلد أيضا120 ميكروجرام جرعة واحدة.
4-مجموعة(5): تم حقنها باستخدام PBS وذلك كضوابط للتجربة. بعد مرور أسبوعين من تحصيين الفئران السويسري للمجموعة (3) والتي تم تحصينها كما سبق تم تقييم المناعة الخلوية وذلك بإجراء اختبار البروسيلين وذلك بحقن ست حيوانات من مجموعة (3) بالبروسيلين بجرعة 0,1 سم تحت الأدمة باستخدام بثلاث تخفيفات مختلفة لكل حيوان 1/10,1/20,1/100) ) حيث أوضح الإختبار نتائج إيجابية بظهور إحمرار وتورم بسيط في مكان الحقن بلغ ذروته بعد 24 ساعة من الحقن وكان التخفيف 10/1 هو أعلى معدل إحمرار وتورم حيث بلغ 13,3مم متوسطه في الست حيوانات التي تم حقنهم .
تم عمل اختبار قوة الصد المناعية للقاحات في الفئران السويسري (اختبار التحدي) وذلك بعد مرور 3 أسابيع بعد آخر تحصيين وذلك بأخذ عشر حيوانات من كل مجموعة من المجاميع المحصنة و حقنها بالعترة الضارية melitensis16M Brucella (1×10 5) مستعمرة حية وبعد مرور ثلاث أسابيع من العدوى بالعترة الضارية تم ذبح عشر حيوانات من كل مجموعة وتتبع ردالفعل المناعي للقاحات المختلفة عن طريق وزن كل حيوان على حدة ثم ذبح الحيوانات وإزالة الطحال في أجواء معقمة وملاحظة الفروق في أوزان الحيوانات والمقارنة بينها وبين أوزان الطحال لهذه الحيوانات وذلك بعمل المعادلات لملاحظة الفروق حسب البروتوكولات العالمية وعمل العد الحيوي للطحال لجميع الحيوانات المذبوحة في المجاميع المختلفة ثم حساب نسبة وزن الجسم / الطحال وعدد ميكروب البروسيلا لكل طحال ولكل جرام من الطحال وكانت النتائج كالآتي:
أظهرت النتائج أن أعلى نسبة حماية في المجموعة رقم (3) التي تم تحصينها باستخدام الجرعات المخفضة (المختزلة) من لقاح الريف (1) المحضر محليا مع الفلاجيلين عن طريق الفم.
ثانيا تم إجراء التجربة على الأغنام وذلك بحقن مجموعة من الأغنام البلدية (31 رأس من الأغنام) وقد قسمت الحيوانات إلى مجموعات كالآتي:
1-مجموعة(1): خمس حيوانات مختلفة السن(واحد من 3-6 شهور, اثنان عشار, اثنان ذكور فوق سن البلوغ) تم تحصينها باستخدام الفلاجيلين المحضر محليا من الإي كولاي فقط وجرعته 60 ميكروجرام على ثلاث جرعات متتالية على مدار ثلاث أسابيع متتالية عن طريق الفم.
2-مجموعة(2): مكونة من ست حيوانات ذكور وإناث عشار وغير عشار فوق سن البلوغ تم تحصينها باستخدام جرعة مخفضة (مختزلة)من لقاح الريف(1) وجرعته (1×10 7) مستعمرة حية بالإضافة إلى الفلاجيلين المحضر من الإيشيريشيا كولاي وجرعته 60 ميكروجرام على ثلاث جرعات متتالية على مدار ثلاث أسابيع متتالية عن طريق الفم.
3-مجموعة(3): تحتوي على خمس حيوانات حيوانات مختلفة العمر تم تحصينها باستخدام الفلاجيلين المحضر محليا من الإي كولاي فقط وجرعته 60 ميكروجرام على ثلاث جرعات متتالية على مدار ثلاث أسابيع متتالية عن طريق الحقن تحت الجلد كما تم حقنها عند 82 يوم كجرعة منشطة لتحضير سيرم عالي التركيز.
4-مجموعة(4): تحتوي على خمس حيوانات تم تحصينها باستخدام الجرعة الكلية من لقاح الريف(1) وهي( 1×10 9) مستعمرة حية عن طريق الحقن تحت الجلد.
5-مجموعة(5): مكونة من خمس حيوانات تم تحصينها باستخدام الجرعة الكلية من لقاح الريف(1) وهي( 1×10 9) مستعمرة حية بالإضافة إلى الفلاجيلين وجرعته 120 ميكروجرام عن طريق الحقن تحت الجلد .
6-مجموعة(6): مكونة من خمس حيوانات تم حقنها باستخدام محلول ملحي وذلك كضوابط للتجربة.
تم تجميع عينات الدم من الأغنام المحقونة عند الأوقات التالية 25و50و77و89و98 يوم بعد التحصيين ثم فصل السيرم وحفظه عند درجة (-70°) لقياس درجة الإستجابة المناعية الخلطية باستخدام الإختبارات السيرولوجية (اختبار الروزبنجال و اختبار التلازن الأنبوبي و اختبار البابا) و وقد أظهرت الإختبارات وجود استجابة مناعية للقاحات في صورة أجسام مناعية في عينات السيرم كالآتي:
مجموعة(1): كل الإختبارات السيرولوجية كانت سلبية من أول وقت للتجميع وحتى آخره.
مجموعة(2): عند التوقيت 25و50 يوم بعد التحصيين كانت هناك عينة واحدة فقط إيجابية من إجمالي ست عينات ثم بعد ذلك جميع العينات أعطت نتيجة سلبية في الأوقات 77و89و98 يوم بعد التحصيين.
مجموعة(3): عند 25و50 يوم بعد التحصيين كانت كل العينات إيجابية ماعدا واحدة فقط كانت سلبية وعند 77 يوم بعد التحصيين عينتان فقط إيجابيتان وثلاث عينات سلبية وعند 89 يوم بعد التحصيين كانت كل العينات إيجابية وعند 98 يوم بعد التحصيين كانت ثلاث عينات إيجابية أثنان سلبية.
مجموعة(4): كل العينات إيجابية في التوقيت 25و50 يوم بعد التحصيين أما عند 77 يوم بعد التحصيين كانت عينة واحدة سلبية من خمس عينات وعند 89 يوم بعد التحصيين ظهرت عينة واحدة إيجابية من خمس عينات بينما عند التوقيت 98 يوم بعد التحصيين كانت كل العينات سلبية.
مجموعة(5): جميع العينات كانت إيجابية في التوقيت 25و50 يوم بعد التحصيين وعند 77 يوم بعد التحصيين ثلاث عينات كانت إيجابي واثنان سلبي وعند التوقيت89و98 يوم بعد التحصيين كانت النتيجة اثنان إيجابي وثلاث عينات سلبي. مجموعة(6): جميع العينات سلبية في جميع الأوقات.
أما بالنسبة لإختبار الإليزا فقد أظهر هذا الإختبار وجود استجابة مناعية للقاحات المختلفة في صورة أجسام مناعية في عينات السيرم بلغت ذروتها عند اليوم 25 بعد التحصيين في جميع مجاميع الأغنام المختلفة.
وقد اشتملت هذه الدراسة أيضا على قياس الإستجابة المناعية الخلوية لمجايع الأغنام المحصنة والغير محصنة عن طريق قياس المناعة الخلوية باستخدام اختبار البروسيلين واختبار التحور الليمفاوي.
في اختبار البروسيلين تم حقن حيوان من كل مجموعة من المجاميع المحصنة والغير محصنة بالبروسيلين كجرعة 0.1 سم تحت الأدمة في منطقة الذيل و أسفل البطن و تحت الجلد في ملتحمة العين بعد اخر جرعة للتحصيين بخمسة عشر يوما ومتابعة النتيجة بعد الحقن ب 48 ساعة و72 ساعة وقد أظهرت النتائج أن أعلى قياس كان بعد 48 ساعة من الحقن في المجموعة رقم (5) حيث كانت 10.14مم ويليها المجموعة (4) كانت القراءة 9.12مم ويليها المجموعة (3) كانت القراءة 8.04مم ثم المجموعة (2) كانت القراءة 7.03 مم.
أظهرت نتائج التحور الليمفاوي استجابة مناعية للقاحات متباينة في معدلاتها بين المجاميع المختلفة المحصنة ولكنها أشارت في مجملها إلى زيادة الإستجابة المناعية الخلوية للمجموعة (2) التي تم تحصينها بالجرعات المختزلة أو المخفضة من اللقاح الريف (1) الحي بالإضافة إلى الفلاجيلين على ثلاث جرعات متتالية على مدار ثلاث أسابيع نتتالية عن طريق الفم.
أثبتت النتائج أن استخدام لقاح الريف (1)الحي في الأغنام للتحصيين ضد مرض البروسيلا كجرعة مخفضة مع الفلاجيلين عن طريق الفم على ثلاث جرعات متتالية هي أفضل طريقة للتحصيين للأسباب التالية:
1-لا تسبب أي حالات إجهاض في الحيوانات الحوامل في مختلف أشهر الحمل.
2-عدم حدوث إلتهاب في الخصية للحيوانات الذكور.
3-عدم استخدام سرنجات أثناء التحصيين مما يمنع انتقال العدوى بين الحيوانات المراد تحصيينها سواء كانت عدوى فيروسية أو طفيلية أو بكتيرية.
4-اختفاء المستوآ المناعي الخلطي في أقل من خمسين يوم بعد الحقن.
5- عدم وجود أجسام مناعية مستديمة في سيرم الحيوانات المحصنة بعد الحقن بثلاث شهور.
6-عدم وجود تفاعل مابعد التحصيين.
7-عدم نقل العدوى نتيجة التحصيين من الحيوانات المحصنة إلى الحيوانات الغير محصنة .
8-يمكن استخدامه في الإناث والذكور والحوامل وغير الحوامل وفي جميع مراحل العمر.