الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 192 |  |  |
| | | from | 192 | | |
Abstract
مرض السكر هو أحد الأمراض الأيضية التي تتميز بارتفاع السكر في الدم وذلك نتيجة لخلل في افراز الانسولين أو عمل الانسولين أوكليهما ويؤدي ارتفاع السكر في الدم علي المدي الطويل التأثير علي مجموعة من أعضاء الجسم خاصة العينين والكليتين والأعصاب والقلب والأوعية الدموي.
ولذلك فإن من اكثر المشاكل التي يعاني منها مرضي السكر هي أمراض الأوعية الدموية التي تؤدي الي ضيق وانسداد الشرايين المغذية للأطراف وكذلك ضعف المناعة الذاتية لدي مرضي السكر كل هذه العوامل تؤدي الي تأخر التئام الجروح خاصة بمنطقة الأطراف ويؤدي ذلك الي حدوث كثير من العدوي ونمو العديد من الميكروبات الدقيقة ويتسبب ذلك في حدوث ما يعرف بمرض القدم السكري والتي قد تودي الي بتر القدم اذا لم تعالج بشكل صحيح حيث انه من اكثر المشاكل التي يعاني منها مرضي القدم السكري هو عدم التئام الجروح برغم استعمال العديد من المضادات الحيوية والسبب في ذلك هي مقاومة هذه الميكروبات لعمل تلك المضادات الحيوية وإبطال مفعولها.
ومن أهم هذه طرق المقاومة التي تعتمد عليها البكتيريا هي افراز مجموعه من الإنزيمات مثل إنزيم البيتا -لاكتام الذي يعمل على تكسير المضادات الحيوية المستخدمة في العلاج وإبطال مفعولها ويؤدي ذلك إلى فشل العلاج وعدم التئام الجرح وحدوث مشاكل قد تؤدي إلي بتر القدم.
لذلك في هذا البحث سوف نقوم بعمل دراسة ميكروبيولوجية و جزيئيه علي البكتريا المنتجة لإنزيم البيتا -لاكتام والمعزولة من مرضي القدم السكري بمستشفيات جامعة المنصورة وتحديد الجينات المسئولة عن انتاج هذه الانزيمات.
حيث قمنا في خلال الفترة من يناير 2015 الي مايو 2015 بعزل 70 بكتريا من اصل 56 مريض بالقدم السكري بوحدة جراحه القدم السكري بمستشفيي جامعه المنصورة بالدقهلية حيث اخذت العينات من المرضي الذكور والاناث ذو الاعمار المختلفة حيث تم اخذ مسحات من عدد 30 مريض من الذكور الذي يتراوح أعمارهم من سن 45 الي 70 سنه وتم أيضا اخذ مسحات من 26 مريضه من الاناث التي يتراوح اعمارهن من 45 الي 65 سنة ثم تم بعد ذالك تجميع أنواعها هذه العزلات البكتيرية وزراعتها علي الوسط الغذائي المناسب لنمو هذه العزلات والتعرف عليها وتم تحديد اشكالها الظاهرية بعد صباغتها بصبغه جرام والتعرف علي أنواعها واجناسها باستخدام التفاعلات البيوكيميائيه المستخدمة للتعرف البكتيري
تم بعد ذالك تجميع العزلات البكتيرية السالبة لصبغه جرام علي أساس الأنماط الشكلية من زراعتها وكانت تمثل 49.10% من العدوي ثم تم أيضا تجميع العزلات البكتيرية الموجبة لصبغه جرام وكانت تمثل 50.8 % من العدوي البكتيرية لمرضي القدم السكري وكانت نسبه المرضي الرجال المصابة بالقدم السكري وتم اخذ مسحات بكتريه منهم 53.5% سائدة عن الاناث التي تمثل 46.4% حيث أظهرت الدراسة ان من اكثر العزلات البكتيرية العصوية السالبة لصبغه جرام هي وجود 4 من Escherichia coli ويتبعها 6 من Klebsiella pneumonia و 2منProteus vulgaris و8من Proteus mirabilis ويتبعها 9 من Pseudomonas aeruginos
وكانت من اشهر العزلات البكتيرية الكروية الموجبة لصبغة جرام هي 10 من Staphylococcus epidermidis ويتبعها 20 من Staphylococcus aureus
ثم تم بعد ذالك عمل الاختبارات المظهرية المستخدمة لإنتاج انزيم البيتا لاكتاميز الممتدة المفعول (ESBL) في جميع العزلات البكتيرية حيث تم عمل اختبار الحساسية بالمضادات الحيوية التابعة لمجموعه البيتا لاكتام مثل السفيروكسيم (CXM ) و السيفترياكسون ( (CRO والامبسيللين سلبكتام (SAM ) والميروبينام (MEM ( والبنسيلين (p ) لكل العزلات البكتيرية والذي اثبت ان غالبيه العزلات البكتيرية كانت مقاومه لهذه المضادات الحيوية ولديها القدرة علي افراز هذه الانزيم الذي يعمل علي تكسير المضادات الحيوية المستخدمة في العلاج وهذا يودي الي افشال العلاج وبالتالي ذيادة مدة بقاء المريض بالمستشفى وزيادة التكلفة المادية والنفسية علي المريض وقد يودي ذالك أيضا الي بتر العضو .
كما أظهرت الدراسة ان المضاد الحيوي الميروينام (MEM) Meropenam هو المضاد الأكثر حساسيه ضد معظم العزلات المختارة من البكتريا ماعدا Staphylococcus aureus كانت مقاومه لهذا المضاد الحيوي كما
أظهرت الدراسة ان المضادات الحيوية ((AK,MEM - Meropenam amikacin كانت هي الأكثر حساسيه لكل البكتريا السالبة لصبغه جرام وان كل العزلات البكتيرية الموجبة لصبغه جرام كان افضل مضاد حيوي اكثر حساسيه معها هو Levofloxacin (LEV)
وأيضا أظهرت الدراسة ان جميع العزلات البكتيرية الموجبة والسالبة لصبغه جرام كانت مقاومه للمضاد الحيوي البنسيلين (P) بنسه 100%
ثم بعد ذالك تم عمل الاختبار الثاني من الاختبارات المظهرية المستخدمة في الدراسه للكشف عن انزيم البيتا لاكتام باستخدام اختبار ورقه الترشيح والذي اعطي نتائج إيجابيه مع كل العزلات البكتيرية.
وبعد ان تم الكشف عن انزيم البيتا لاكتام باستخدام الاختبارات المظهرية تم عمل الاختبار التأكيدي باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل حيث تم استخراج جميع العزلات المنتجة لأنزيم البيتا لاكتام ممتدة المفعول في المختبر وتعرضت لتفاعل البلمرة المتسلسلة(PCR) للكشف عن جينات البيتالاكتام ممتدة المفعول (ESBL)باستخدام السلاسل الاوليه المحددة لإنتاج البيتالاكتاميز الممتدة المفعول وهي bla CTX-M, bla TEM, blaSHV, blaOXA وقد تم تحليل PCR المنتجة للبيتا لاكتاميز ممتدة المفعول بواسطه جهاز النابض الكهربي الهلامي (PEGE) وتمت مشاهدتها بواسطه تعرضها للأشعة الفوق بنفسجية في جهاز التوثيق الهلامي (Gel documentation system)
تم الكشف عن منتجات PCR في 7 عزلات من البكتريا المنتجه للبيتالاكتاميز ممتدة المفعول حيث سجل أنماط الجين bla TEM(861Pb) في كل العزلات البكتيرية كما سجلت أنماط الجينات bla CTX-M (600Pb), blaSHV(885pb) في اربع عزلات بكتيرية وهي Escherichia coli. وStaphylococcus epidermidis ,Staphylococcus aureusو Pseudomonas aeruginos ولم يتم تحديد هذه الأنماط من الجينات في Klebsiella pneumonia وProteus vulgaris و Proteus mirabilis
كما اثبتت واظهرت الدراسة عدم وجود أنماط الجين ,blaOXA في كل العزلات البكتيرية مما يوكد غياب هذ الجين في جمهوريه مصر العربية الي الان.