الفهرس 
AbstractOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 118 |  |  |
| | | from | 118 | | |
Abstract
يعتبر الجفاف من الإجهادات البيئية الخطيرة التي تهدد انتاجية وجودة المحاصيل الزراعية. ولقد اصبح استخدام تكنولوجيا التحول الوراثي في إدخال أحد جينات عوامل النسخ المسؤولة عن تنظيم التعبير الجيني من التقنيات الواعده في مجال انتاج نباتات متحملة لكثير من الظروف البيئية المختلفة. هناك مجموعات عديدة من عوامل النسخ التي تنظم التعبير الجيني لجينات الإستجابة للإجهادات البيئية. يحمل جين DREB2A الشفرة الوراثية لواحد من اهم عوامل النسخ الموجوده في النبات. يرتبط عامل النسخ DREB2A بتتابعات محدده وخاصة تسمى (DRE/CRT) والموجودة في منطقة المحفز لبعض جينات الإستجابة لإجهاد الجفاف في النبات.
تهدف الدراسة الحالية الى تحسين صفة تحمل الجفاف في نباتات الطماطم عن طريق ادخال جين OsDERB2A المعزول من نبات الأرز بواسطة إحدى تقنيات التحول الوراثي وهي العدوى ببكتريا الأجرو. وقد جاءت الدراسة الحالية في ثلالثة فصول:-
- في الفصل الأول تم تحديد أكثر السلالات (genotypes) إستجابة للإستلاد المباشر (Direct Regeneration)، وتحديد الأوساط العذائية المناسبة لها، ليتم نقل جين تحمل الجفاف OsDERB2A لتلك السلالات. اشتملت تلك الدراسة على استخدام طرق زراعة الأنسجة النباتية لتأسيس بروتكول للإكثار الدقيق (micropropagation) لخمسة سلالات مختلفة، تم الحصول عليها من بنك الجينات المصري وتحمل الأكواد (13139 ”E1” و 13163 ”E2” و 13145 ”E3” و 12676 ”F4” و 12702”E5” ). وقد أظهرت النتائج ان السلالتين E3 و F4 سجلت افضل النتائج من حيث نسبة الإكثار ( 86% و 100%) وعدد النباتات المتولدة/جزء معزول (13 و 9) عند وضع الورقة الجينية (cotyledonary explats) لتلك النباتات على وسط غذائي مزود بـ zeatin (1 مجم/لتر) وBAP (1 مجم/لتر). كما ان استخدام الـ IAA بتركيز 1 مجم/لتر كان الأحسن على الإطلاق مع كل السلالات لإنتاج الجذور.
- في الفصل الثاني تم ادخال جين ال OsDREB2A الي المحتوى الجيني للسلالاتين E3 و F4 وذلك عن طريق العدوى ببكتريا الأجرو LBA4404 و التي تحمل البلازميد pCAMBIA1301 المحتوى على جين OsDREB2A المقاوم للجفاف والمحكوم بالمنظم التأسيسي (Constitutive Promoter; CAM35S). وقد تم توليد النباتات المعدلة وراثيا على وسط غذائي انتقائي مزود بـ zeatin (1 مجم/لتر) وBAP (1 مجم/لتر) وB hygromycin (30مجم/لتر). وقد استغرق هذا البروتكول ثمانية اسابيع لإنتاج نباتات طماطم الحاملة لجين OsDREB2A المقاوم للجفاف. بلغت نسبة التحول الوراثي للسلالاتين E3 و F4 76.9% و 64.4%. في حين كان عدد النباتات المتولدة/جزء معزول 3.42 و 2.76. تم التأكد من ادخال الجين وتعبيره في نباتات الطماطم عن طريق بعض التحاليل الجزيئية مثل الــ PCR و RT-PCR .
- في الفصل التالت تم اختبار مدى تحسن صفة تحمل الجفاف في النباتات المعدلة وراثيًا. وذلك عن طريق اخضاع اقراص دائرية من اوراق النباتات الحاملة لجين OsDREB2A والنباتات الغير حاملة للجين لإجهاد الجفاف المستحث عن طريق مادة المانيتول (300 ملي مول). وبالمقارنه بالنباتات الغير حاملة للجين، فإن زيادة الكتلة الحيوية وكمية الأصباغ الضوئية والسكريات الذائبة والبرولين في النباتات المحوله وراثيًا عن غير المحولة اظهرت تحسن في صفة تحمل الجفاف في تلك النباتات. حيث اثبت ان التعبير التأسيسي لعامل النسخ ((OsDREB2A داخل النباتات المعدلة وراثيًا كان لها اثر في تعبير بعض جينات الإستجابة لإجهاد الجفاف. و يمكن اعتبار النتائج الحالية بداية في طريق انتاج سلالات من الطماطم المتحملة للجفاف عن طريق تكنولوجيا التحول الوراثي.