الفهرس 
Introduction
TaxonomyOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 246 |  |  |
| | | from | 246 | | |
Abstract
دراسة فيتوكيميائية وبيولوجية لبعض النباتات التي تنتمي للعائلة الخبازية
تعتبر العائلة الخبازيه من العائلات المزهرة في المملكة النباتية التي تحتوي على أكثر من مائتين جنسا مع ما يقرب من ألفي وثلاثمائة نوع. براشيكيتون هو جنس صغير يتضمن ما يقرب من ثلاثين نوعا موطنها الأصلي هو أستراليا. ويعرف أعضاء هذا الجنس بشجرة الزجاجة بسبب انتفاخ جزع الشجرة كشكل الزجاجة. وأدت الدراسة الكيميائية للنباتات التي تنتمي لجنس براشيكيتون إلى فصل أنواع مختلفة من المركبات مثل الستيرولات، التريتيربينات، الفلافونويدات، الكومارينات، والقلويدات. وتوجد لبعض هذه النباتات إستخدامات متعددة مثل: مضاد للميكروبات، مضاد الأكسدة، مكافحة البلهارسيا ونشاط مضاد للسكري. وقد تم اختيار براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم كموضوع للبحث نظرا لندرة الدراسات البيولوجية والكيميائية للنباتين.
وتقع الرسالة في (208) صفحة وتحتوي على (50) شكلا توضيحيا وعدد (27) جدولا تضمنت البيانات الهامة المستخلصة من البحث وختمت الرسالة بملخص باللغة العربية واخر باللغة الانجليزية وعدد (253) مرجعا في مجال البحث والتخصص.
وتتكون هذه الرسالة من أربعة أجزاء رئيسية:
1- القيام بعمل دراسة كاملة تم فيها جمع كل النتائج التي سبق الوصول اليها من قبل والمتعلقة بالمركبات الكيميائية والأنشطة البيولوجية لجنس براشيكيتون والجنس الأكثر صلة ستيركوليا.
2 - عمل دراسة بيولوجية للمستخلص الكحولي والأجزاء المختلفة لأوراق براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم بما في ذلك التأثير السام على الخلايا السرطانية، التأثير المضاد للميكروبات، التأثير مضاد للحساسية و المضاد للالتهابات. وتم أيضا دراسة التأثير المضاد للسكري والتأثير الواقي للكبد.
3- إجراء فحص كيميائي أولي على أوراق براشيكيتون روبيستريس متبوعا بدراسة فيتوكيميائية متعمقة لمستخلص الميثانول في محاولة لفصل المركبات المسؤولة عن النشاط البيولوجي وتعريف التركيب الكيميائي لها باستخدام كل من الوسائل الكيميائية والطيفية على سبيل المثال الأشعة فوق البنفسجية، 1H-NMR, 13C-NMR. وكذلك تم تنفيذ تقنية LC-MS على جزء أسيتات الإيثيل بهدف التعرف مبدئيا على المكونات الرئيسية به.
4- أجريت دراسة شاملة عن الزيوت الطيارة للأوراق والزهور الطازجة من براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم بهدف إستكشاف مكوناتها الكيميائية. وكذلك تم دراسة التأثير السام للخلايا السرطانية والتأثير المضاد للميكروبات لكل من الأوراق والزهور من النباتين.
الفصل اللأول:
الفحص البيولوجي للمستخلص الكحولي لأوراق نباتي براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم التابعين للعائلة الخبازية
يتضمن هذا الفصل فحص الأنشطه التالية:
• التأثير السام على الخلايا السرطانية
تم قياس السمية الخلوية للمستلخص الميثيلي والأجزاء الخاصة بأوراق نباتي براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم على ثلاثه أنواع من الخلايا السرطانية و هيHepG2 ، MDA-231 و A549عند تركيز قدره 20 ميكروغرام/مليلتر. لم يبد المستخلصات والأجزاء الخاصة بأوراق براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم أي تأثير سام على الخلايا فيما عدا جزء ثنائي كلورو الميثان الخاص بأوراق براشيكيتون لوريدم على الخلايا السرطانية MDA-MB-231 الذي أظهر تأثير ضعيف حيث بلغت نسبة التثبيط 13.17٪. كما أظهر المستخلص الكحولي و أجزاء الهكسان و ثنائي كلورو الميثان نسبة تثبيط وصلت الى 12.59 ، 8.18 و 14.99٪ بالترتيب على الخلايا السرطانيةA549 والتي تعتبر نسبة ضعيفة اذا ما قورنت بالدوكسوروبيسين عند 2 ميكروغرام/مليلتر.
• التأثير المضاد للميكروبات
تم دراسة التأثير المضاد للميكروبات للمستخلصات الكحولية وأجزاء هيكسان، ثنائي كلورو ميثان وكذلك أسيتات الإيثيل من أوراق براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم . أجريت الدراسة ضد اثنين من البكتيريا إيجابية الجرام واثنين من البكتيريا سالبة الجرام مع اثنين من الفطريات. وأظهرت المستخلصات والأجزاء قيم MIC تتراوح بين 39.06 و 625 ميكروغرام/مل ضد البكتيريا والفطريات. وأظهر جزء أسيتات الإيثيل من براشيكيتون لوريدم نشاطا ملحوظا ضد Staphylococcus aureus في حين أظهر المستخلص الكحولي نشاط معتدل ضد Salmonella typhi. فيما يتعلق ببراشيكيتون روبيستريس ، أظهر المستخلص الكحولي ، أجزاء هكسان وأسيتات الإيثيل نشاط معتدل ضد Escherichia coli، Candida albicans، Salmonella typhi ، على التوالي. وأظهرت المستخلصات والأجزاء الأخرى ضعف أو عدم وجود نشاط ضد الكائنات الدقيقة المجربة.
• التأثير المضاد للحساسية
تم تقييم النشاط المضاد للحساسية بالنسبة للمستخلصات الكحولية والأجزاء الخاصة من أوراق براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم. وقد أظهرت الدراسة أن جزء الهيكسان الخاص ببراشيكيتون روبيستريس وجزء ثنائي كلورو الميثان الخاص ببراشيكيتون لوريدم تسببا في تخفيض إطلاق بيتاهيكسوامينيداز من الخلايا استجابة لوجود A23187 وبلغ التركيز الفعال 100 ميكروغرام/مل ، والنسب المئوية لتخفيض اطلاق بيتاهيكسوامينيداز هي 44.7 و 47.7٪ بالنسبة لجزئي الهيكسان و ثنائي كلورو الميثان.
• التأثير المضاد للالتهابات
تم قياس التأثيرعلى المستخلصات الكحولية والأجزاء الخاصة من أوراق براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم حيث أظهرت معظم المستخلصات والأجزاء تأثير مضاد للالتهابات. وأظهر جزء ثنائي كلورو الميثان الخاص ببراشيكيتون روبيستريس تثبيط قوي لتوليد أيونات فوق الاكسيد و الإلاستيز حيث وصلتIC50 الى 2.99 ميكروغرام/مل و 1.98 ميكروغرام/مل علي الترتيب. كما أن جزء ثنائي كلورو الميثان من براشيكيتون لوريدم منع توليد ايونات فوق الاكسيد و الإلاستيز عند IC50 تساوي 0.78 ميكروغرام/مل.
• التأثير الوقائي للكبد (In vivo)
تم علاج الفئران التي تعاطت رابع كلوريد الكربون باستخدام المستخلص الكحولي لبراشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم وكذلك جزء أسيتات الإيثيل من براشيكيتون روبيستريس باستخدام جرعة تساوي50 ميلليغرام/كيلوغرام, وتسبب معظمها انخفاضا كبيرا في أنشطه AST و ALT. حيث انخفضت مستويات الAST بنسبه 28.88 و 27.2٪ علي التوالي لكل من المستخلص الكحولي و جزء أسيتات الإيثيل لبراشيكيتون روبيستريس عند مقارنتها بالفئران المعالجة برابع كلوريد الكربون. كما انخفضت مستويات ALT وكانت النسب المئوية للانخفاض 8 و 44 و 13.56٪ بالنسبة للمستخلص الكحولي لبراشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم وكذلك جزء أسيتات الإيثيل من براشيكيتون روبيستريس ، علي الترتيب.
وتم أيضا قياس حاله مضادات الأكسدة الاجماليه(TAS) ولوحظ انها زادت بنسبة 107.27 و 68.58 و 88.50٪ لكل من المستخلص الكحولي لبراشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم وكذلك جزء أسيتات الإيثيل من براشيكيتون روبيستريس بالمقارنة مع الفئران المعالجة برابع كلوريد الكربون ، وكذلك زادت مستويات SODبمقدار 78.90 و 84.16٪ في حين زادت مستويات CAT بمقدار 89.74 و 87.17٪ وانخفض إنتاج (Lipid peroxides) بنسبه 52.32 و 18.69 و 44.06٪. وقد تكون هذه الانشطه نتيجة لوجود الفينولات التي لها نشاط وقائي للكبد من خلال ازالة الشوارد الحرة وكونها مضاد قوي للاكسده.
• التأثير الخافض لسكر الدم (In vivo)
تم علاج الفئران باستخدام المستخلص الكحولي لبراشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم وكذلك جزء أسيتات الإيثيل من براشيكيتون روبيستريس باستخدام جرعة تساوي50 ميلليغرام/كيلوغرام بعد اصابتها بالسكري نتيجة تعاطيها عقار ستربتوزوتوسين وقد تسببت هذه المستخلصات النباتية في انخفاض مستوي الجلوكوز في الدم بنسبة 39.38 و 9.85 و 42.09٪ علي الترتيب بالمقارنة مع الفئران التي تعاطت الستريبتوزوتوسين. ورافق الإنخفاض في مستوي الجلوكوز في الدم زيادة كبيرة في مستوي الإنسولين بنسبة 35.62 و 53.30 و 15.44٪ بالنسبة لكل من المستخلص الكحولي لبراشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم وكذلك جزء أسيتات الإيثيل من براشيكيتون روبيستريس علي التوالي.
كما انخفض إنتاج(Lipid peroxides) انخفاضا كبيرا و كانت النسبة المئوية للإنخفاضات هي 51.43 و 22.85 و 46.22٪ لكل من المستخلص الكحولي لبراشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم وكذلك جزء أسيتات الإيثيل من براشيكيتون روبيستريس علي التوالي. وقد زادت حاله مضادات الأكسدة الاجماليه(TAS) بنسبة 95.78 و 70.49 و 107.66٪. كما زادت مستويات SOD و CAT بعد العلاج حيث زادت مستويات SOD بنسبه 69.93 و 65.23٪ في حين زادت مستويات CAT بنسبه 88.09 و 80.95٪. ويمكن إرجاع هذه الآثار الملحوظة إلى وجود كمية كبيرة من الفينولات التي تم إثبات نشاطها المضاد لمرض السكري في دراسات مختلفة.
الفصل الثاني:
التركيب الكيميائي للمستخلص الكحولي من براشيكيتون روبيستريس
ب) فحص فيتوكيميائي أولي لأوراق براشيكيتون روبيستريس
كشفت الاختبارات الفيتوكيميائية الأولية عن وجود الفلافونويدات والعفص والستيرولات و/ أو ترايتيربينات، والكربوهيدرات و / أو جليكوسيدات وعن عدم وجود الأنثراكينون و جليكوسيدات القلب والصابونين و القلويدات.
ب) دراسة فيتوكيميائية شاملة على الخلاصة الكحولية لأوراق نبات براشيكيتون روبيستريس
تم تحضير المستخلص الكحولي لأوراق براشيكيتون روبيستريس وتجزئتها مع الهيكسان، ثنائي كلورو ميثان، أسيتات الإيثيل و بيوتانول. وقد تم تعريض أجزاء الهيكسان، ثنائي كلورو ميثان وأسيتات الإيثيل الى مزيد من التجزؤ الكروماتوغرافي حيث تعرضت هذه الأجزاء إلى تقنية العمود الكروماتوغرافي لعدة مرات مما أدى إلى فصل المركبات الكيميائية. تمت تنقية هذه المركبات باستخدام تقنية كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة التحضيرية(Preparative TLC) للحصول على 7 مركبات نقية تم تحديدها بواسطة تقنيات الرنين النووي المغناطيسي لذرات الهيدروجين والكربون 1H-NMR و , 13C-NMR وتقنية NMR ثنائية الأبعاد بما في ذلك تقنيات 1H-1H COSY و HSQC و HMBC بعد المقارنة مع ما هو معلوم عنها بالمراجع والكتب والأبحاث المنشورة.
وتشمل المركبات المفصولة؛
مركب (1): بيتا اميرين أسيتات
مركب (2 و 3): بيتا سيتوستيرول و ستيجماستيرول
والتي تم فصلها من جزء الهيكسان
مركب (4): سكوبوليتين
مركب (5): بيتا سيتوستيرول-3O--β--Dجلوكوسايد
والتي تم فصلها من جزء ثنائي كلورو ميثان.
مركب (6): دايهيدروديهيدرو كحول الكونيفيريل-4-D-β-O-جلوكوسايد
مركب (7): دايهيدروديهيدرو كحول الكونيفيريل-9-D-β-O-جلوكوسايد
واللذين تم فصلهم من جزء أسيتات الإيثيل
المركبات 6 و 7 تم فصلها من الجنس لأول مرة في حين كانت المركبات 1 و 2 و 3 و 4 و 5 مفصولة سابقا من الجنس ولكن لم يسبق فصلها من النوع.
وقد تم قياس النشاط السام الخلوي علي المركبات (1 و 4) المعزولين من جزئي الهكسان والديكلوروميثان من براشيكيتون روبيستريس. ولم تظهر المركبات اي تسمم خلوي عند تركيز 20، 10، 5، 2.5 ميكروغرام/مليلتر. كما تم قياس التأثير المضاد للالتهابات على هذه المركبات حيث أظهر مركب (4) نشاط ملحوظ ومن المفترض ان تكون هذه المركبات هي المسئولة عن التأثير الناجم من هذه الأجزاء.
وعلاوة على ذلك، تم تعريف عشرة مركبات من جزء أسيتات الإيثيل من براشيكيتون روبيستريس بواسطة تقنية كروماتوجرافيا السائل المتصلة بمطياف الكتلة ((LC-MS وهي:
11. كيرسيتين-3-O-أرابينوسايد
12. كيرسيتين-3-D-β-O-جلوكوسايد
13. كامبفيرول-3-D-β-O-روتينوسايد
14. كامبفيرول-3-D-β-O-جلوكوسايد
15. بارا-هيدروكسي حمض البنزويك
والتي كانت مفصولة سابقا من الجنس
16. كيرسيتين-3-O-(``6-O-α-L-رامنوبيرانوسايد)-β-D-جلوكوسايد
17. حمض الكوماريك
18. ليوكوانثوسيانيدين-3-L-α-O- رامنوبيرانوسايد
والتي كانت مفصولة سابقا من الأجناس الأخرى ذات الصلة كجنسي ستيركوليا أو بتيريغوتا
19. حمض الفيروليك
20. دايهيدروديهيدرو كحول الكونيفيريل-9-D-β-O-جلوكوسايد
والتي كانت مفصولة في السابق من أفراد العائلة الخبازية.
كما تم إجراء نمذجة جزيئية للمركبات التي تم التعرف عليها من جزء أسيتات الإيثيل على إنزيمين لهما دور هام في تنظيم مستوى السكر في الدم وهما: α- أميلاز و α- غلوكوزيداز. وأكدت الدراسة النشاط المضاد للسكري للفلافونويدات التي تم تحديدها من جزء أسيتات الإيثيل من براشيكيتون روبيستريس وخاصة كيرسيتين-3-O-(``6-O-α-L- رامنوبيرانوسايد)- β- D-جلوكوسايد الذي أظهر أكبر تقارب تجاه الانزيمين كما كشفت طاقة الربط الحرة (ΔG) قيم قريبة جدا من الأكربوز.
الفصل الثالث:
التركيب الكيميائي والفاعلية البيولوجية للزيوت الطيارة لبراشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم
أ) تحليلات كروماتوجرافيا الغاز (GC) وكروماتمجرافيا الغاز المتصلة بمطياف الكتلة ( (GC/ MS للزيوت
تم تحليل الزيوت الأساسية التي تم الحصول عليها من أوراق وزهور براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم كميا ونوعيا باستخدام تقنيات GLC/FID و GC/MS. وكانت نسبة الزيوت من وزن أوراق وزهور نبات براشيكيتون روبيستريس هي 0.2 و 0.3٪ w/w، على الترتيب بينما كانت النسبة للزيت من وزن أوراق وزهور براشيكيتون لوريدم هي 0.2٪ و 0.4٪ w/w، على الترتيب. وأظهر تحليل GC/ MS وجود 92 مركب يمثلون 86.1٪ و 86.18٪ من زيوت أوراق وزهور براشيكيتون روبيستريس على التوالي. من ناحية أخرى، كانت هذه المركبات تمثل 90.31٪ و 93.28٪ من زيوت أوراق وزهور براشيكيتون لوريدم. وقد تم تحديد التركيب الكيميائي لهذه الزيوت باستخدام بالبيانات المذكورة سابقا.
تم تحليل مكونات الزيت الخاص بأوراق براشيكيتون روبيستريس وتم التعرف على 56 مركب حيث كان α- فارنيسين (34.57٪) هو المكون الرئيسي يليه فيتول (11.57٪)، n-بنتاكوسان (4.48٪)، α-كادينول (3.84٪)، α-كادينين (3.81٪)، n-هيبتاكوسان (3.8٪)، حمض البالمتيك (3.18٪)، إليمول (2.74٪)، τ-غورجونين (2.36٪)، β-كاريوفيلين (1.98٪). كما تم التعرف على 21 مركبا من الزهور حيث كان n-هبتاكوزان (29.95٪)، n-بنتاكوسان (17.63٪)، حمض البالمتيك (10.63٪)، n-تريكوسان (4.92٪)، n-ديكان (4.03٪)، و بنتاديكانال (3.85٪) هم المكونات الرئيسية.
وتم تحديد 53 مركب من زيوت أوراق براشيكيتون لوريدم وكان هبتاديكاترينال (21.2%)، بنتاديكانال (13.54٪)، 9،17-أوكتاديكادينال (7.11%)، فيتول (6.82٪)، n-هيبتاكوسان (6.76٪) ،حمض البالمتيك (5.98٪)، α-فارنيسين (4.25٪) و n-بنتاكوسان (4.08٪) يمثلون غالبية المركبات. وكان حمض البالمتيك يشكل المكون الكيميائي الرئيسي (83.49٪) بين الاثنين وخمسين مركبا المحددين في زيوت وزهور براشيكيتون لوريدم. و مما سبق ذكره من الممكن استنتاج أن سيسكيتربينز هي المكونات الغالبة في زيت أوراق براشيكيتون روبيستريس (43.73٪)، في حين أن الأحماض الدهنية ومشتقاتها تمثل المكونات السائدة في أوراق و زهور براشيكيتون لوريدوم وكذلك في الزهور الخاصة ببراشيكيتون روبيستريس.
ب) التحليل الكيميائي متعدد المتغيرات
إن تقنيات التعرف على الأنماط غير الخاضعة للإشراف لتحليل البيانات متعددة المتغيرات التي تمثلها التحليل العنقودي الهرمي (HCA) والتحليل المبدئي للمكونات (PCA) استطاعت التتمييز بشكل فعال بين نوعي براشيكيتون وأعضائهما المختلفة. وقد أظهر المخطط التوضيحي للتجميع الذي تم الحصول عليه من (HCA) اختلاف بين النوعين وكذلك أعضائهما عن طريق تكوين أربع مجموعات تمييزية. كما تم تمييز العينات المختبرة بنجاح في أربع مجموعات موزعة على نطاق واسع حيث كان PC1 و PC2 يمثلان 73 و 13٪ من التباين، على التوالي.
ج) التأثير السام على الخلايا السرطانية
تم قياس التأثير السام للزيوت الطيارة لأوراق وزهور براشيكيتون روبيستريس و براشيكيتون لوريدم على ثلاثة أنواع من الخلايا السرطانية المختلفة وهي MCF-7، A-549، و HepG-2. ولقد أظهرت النتائج أن المكونات الطيارة من براشيكيتون لوريدم التي تم الحصول عليها من الزهور لها أعلى سمية ضد الخلاية السرطانية A-549 وكانت IC50 تساوي 7.98 ميكروغرام/مل.في حين أظهرت أوراق براشيكيتون روبيستريس تأثيرا ساما ضد خلايا HepG2 وكانتIC50 تساوي 8.57 ميكروغرام/مل. ويعزى هذا التأثير السام على الخلايا السرطانية الى التأثير التآزري للمكونات المختلفة في الزيت.
د) التأثير المضاد للميكروبات
تم تقييم فعالية عينات الزيت كمضادات لمجموعة من البكتيريا والفطريات .وأظهرت المكونات الطيارة من أوراق براشيكيتون لوريدم أعلى قوة ضد جميع الكائنات الدقيقة المجربة (MIC بين 0.98 و 15.63 ميكروغرام/مل) باستثناء Salmonella typhi.