الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 296 |  |  |
| | | from | 296 | | |
Abstract
أجريت هذه الدراسة فى معمل البيوتكنولوجي- معهد بحوث البساتين- مركز البحوث الزراعية بالجيزة خلال الفترة من 2015-2017 ، وذلك على خمس سلالات بذرية من أصل الكمثرى (البيتشوفوليا) وأربعة سلالات بذرية من اصل الخوخ (ميت غمر) عمر سنة.
تم إجراء ثلاثة تجارب وهي:
1- تعريف السلالات البذرية لكل من أصل الكمثرى و أصل الخوخ على المستوى الجزيئي وتحديد كاشفات جزيئية مرتبطة بتحمل الملوحة.
2- الإكثار المعملي للسلالات البذرية لكل من الكمثرى والخوخ.
3- تقييم تحمل الملوحة معملياً.
1. الكشف والتمييز الجزيئى للسلالات البذرية لكل من أصل الكمثرى والخوخ
ا- الكشف الجزيئي
تم استخدام اختبار (MAS) لرصد وجود أو عدم وجود جينات تحمل الملوحة علي ستة عشر سلالة بذرية من أصل الكمثرى وخمسة عشر سلالة بذرية من أصل الخوخ قيد الدراسة كالآتي:
1. حزمة واحدة مميزة (محددة) للجين BADH عند 700bp كانت موجودة في جميع السلالات البذرية الكمثري باستثناء ثلاث سلالات.
2. حزمة واحدة مميزة (محددة) للجين RubisCO عند 680bp كانت موجودة في جميع السلالات البذرية لأصل الخوخ
ب- التمييز الجزيئي
تم إستخدام التضاعف لأجزاء من الدنا والبوادئ المتخصصة بإستخدام جهاز تفاعل سلسلة البلمرة بطريقة تكرارالتتابع البيني البسيط (ISSR-PCR) والشفرة البادئة المستهدفة (SCoT-PCR) لتقدير التباين الوراثي بين خمس سلالات بذرية من الكمثرى وأربع سلالات بذرية من الخوخ .
نجحت ستة بوادئ ISSR وعشرة بوادئ SCoT مع السلالات البذرية الخمسة من الكمثرى والسلالات البذرية الأربعة من الخوخ في اظهار مستويات عالية من التباين الوراثي كالآتي:
1- نجحت خمسة بوادئ ISSR وتسعة بوادئ SCoT للسلالات البذرية الخمسة من أصل الكمثرى وعلي مستوى ISSR وصل العدد الكلي الناتج 43 حزمة خلال الخمس سلالات منها 32 حزمة متغايرة بنسبة تباين 74,4 %. انتجت البوادئ عدد من الحزم تتراوح من 4 حزم (primer 89A) إلى 14حزمة (primer HB-14) وكانت اقل نسبة تباين للحزم المتغايرة هي 42,8 % عند البادئة 14Aوأعلى نسبة هي 92,8 % عند البادئة .HB-14 اما علي مستوى SCoT وصل العدد الكلي الناتج 62 حزمة خلال الخمس سلالات منها 44 حزمة متغايرة بنسبة تباين 71% .انتجت البوادئ عدد من الحزم تتراوح من 3 (primer SCoT-2) حتي 11 حزمة (primer SCoT-4 ) وكانت أقل نسبة تباين للحزم المتغايرة هي 25 % عند البادئة SCoT-8 وأعلى نسبة هي 88,9 % عند البادئة SCoT-9.
2- نجحت خمسة بوادئ ISSR وتسعة بوادئ SCoT للسلالات البذرية الأربعة من أصل الخوخ وعلي مستوى ISSR ووصل العدد الكلي الناتج إلى 31 حزمة خلال الأربع سلالات منها 15 حزمة متغايرة بنسبة تباين 48,4 % .انتجت البوادئ عدد من الحزم تتراوح من 5 (primer HB-14) إلى 8 حزم (primer 44B) وكانت أقل نسبة تباين للحزم المتغايرة 20% عند البادئة 14Aو البادئة HB-14 وأعلي نسبة 85,7 % عند البادئة .HB-12 اما على مستوى SCoT وصل العدد الكلي الناتج إلى 66 حزمة خلال الأربع سلالات منها 37 حزمة متغايرة بنسبة تباين 56,1%. انتجت البوادئ عدد من الحزم تتراوح من 4 ( primer SCoT-8و primer SCoT-12) إلى12حزمة (primer SCoT-3 ) وكانت أقل نسبة تباين للحزم المتغايرة 25 % عند البادئة SCoT-8 وأعلى نسبة 77,8 % عند البادئة SCoT-9 وكذلك كان العدد الكلي للحزم المميزة للسلالات البذرية لكل من اصل الكمثري والخوخ 29 حزمة علي مستوى ISSR و39 حزمة على مستوى SCoT.
2. الإكثار المعملي للسلالات البذرية لأصل الكمثري والخوخ
أجريت هذه التجربة بهدف الوصول لتقنية زراعة الأنسجة المثلى لإكثار السلالات البذرية لأصول الفاكهة متساقطة الأوراق محل الدراسة.
أ. مرحلة التعقيم
تم إستخدام منفصلات نباتية من الأفرع حيث تم غمسها (30 ثانية) في كحول الإيثيل بتركيز 70٪ ثم نقعت في محلول كلوروكس تجاري بالطرق الآتية :
الأولى بتركيز 10٪ لمدة 10 دقائق ، الثانية بتركيز 15% لمدة 10 دقائق والثالثة بتركيز 15% لمدة 15 دقائق وتم زراعة المنفصلات النباتية المجهزة علي بيئة موراشيجي وسكوج والمضاف إليها 30جم/لتر سكروز، 1ملجم/لتر نفثالين حامض الخليك و2.5ملجم/لتر بنزيل أدينين.
فيما يتعلق بالسلالات البذرية للكمثري، كانت الطريقة الثانية للتعقيم بتركيز(15% لمدة 10 دقائق) هي الأفضل حيث كانت نسبة الخلو من التلوث تتراوح من 90 إلى 100% ونسبة البقاء تتراوح من80 الي 100% .
وفيما يتعلق بالسلالات البذرية للخوخ، كانت الطريقة الثانية للتعقيم بتركيز(15% لمدة 10 دقائق) هي الأفضل حيث نسبة الخلو من التلوث و البقاء 100% .
ب. مرحلة التضاعف
تم تجميع الأفرع المتجددة وزراعتها منفصلة على بيئة موراشيجي وسكوج والمضاف إليها 30جم/لتر سكروز مع إضافة 2.5ملجم/لتر بنزيل أدينين و2ipملجم/لتر لإستحداث معدل تضاعف عالي.
فيما يتعلق بالسلالات البذرية للكمثرى وبعد أربعة أسابيع ، أعطت السلالة Bf-stV أعلى القيم من حيث عدد الأفرع ، والسلالة Bf-stI من حيث طول الساق والسلالة Bf-stIV من حيث عدد الأوراق في حين كانت السلالة Bf-stIII الأدنى من حيث عدد الأفرع ، والسلالة Bf-stII من حيث طول الساق والسلالة Bf-stII من حيث عدد الأوراق.
وفيما يتعلق بالسلالات البذرية للخوخ وبعد أربعة أسابيع ، أعطت السلالة MG-stII أعلى القيم من حيث عدد الأفرع وطول الساق والسلالة MG-stIV من حيث عدد الأوراق في حين كانت السلالة MG-stIV الأدنى من حيث عدد الأفرع ، والسلالة MG-stIII من حيث طول الساق والسلالة MG-stII من حيث عدد الأوراق.
ج. مرحلة التجذير
تم فصل الأفرع المتضاعفة والمنتجة خلال المرحلة السابقة وزراعتها على بيئة موراشيجي وسكوج نصف تركيز والمضاف إليها 30جم/لتر سكروز و 7جم/لتر آجارنقي. وكانت معاملات الأوكسين هى0.5 ملجم/لتر نفثالين حامض الخليك و0.5 ملجم/لتر إندول حامض البيوتريك و0.5 ملجم/لتر إندول حامض الخليك ثم حفظ البرطمانات المنزرعة على 5oم في الظلام لمدة أسبوعين قبل التحضين علي 25ºم ± 2 مع دورات إضاءة/إظلام لمدة 16/8 ساعات تحت قوة إضاءة حوالى 2000 لاكس.
فيما يتعلق بالسلالات البذرية للكمثرى ، كانت السلالة Bf-stII أعلى نسبة مئوية للتجذير ، بينما أعطت السلالتين Bf-stI و Bf-stIII أدنى القيم.
فيما يتعلق بالسلالات البذرية للخوخ ، كانت السلالة MG-stIII أعلى نسبة مئوية للتجذير ، في حين أعطت السلالة MG-stII أدنى القيم.
بالنسبة لنسبة التجذير وعدد الجذور وطول الجذر، كان NAA (نفثالين حامض الخليك) هو أفضل هرمون للتجذير ثم IBA (إندول حامض البيوتريك) ثم IAA(إندول حامض الخليك).
3. تقييم التحمل للملوحة للسلالات البذرية لكل من أصل الكمثرى والخوخ
تم الحصول علي المواد النباتية اللازمة لتلك التجربة من الأفرع المتضاعفة المنتجة خلال تقنية زراعة الانسجة.
تم تنمية المنفصلات النباتية معملياً لمدة أربعة أسابيع علي بيئة موراشيجي وسكوج تحتوي علي 2.5 ملجم/لتر بنزايل أدينين مع إضافة كلوريد صوديوم بتركيزات 0، 1000، 2000 و 3000 جزء في المليون والمضافة كل على حدة إلى بيئة الزراعة. تم تقدير النسبة المئوية للبقاء، عدد الأفرع و طول النمو الخضري.
ا. استجابة النمو معملياً لاجهاد الملوحة
فيما يتعلق بالكمثرى وبعد أربعة أسابيع تم تقديرالنسبة المئوية للبقاء، عدد الأفرع و طول النمو الخضري، حيث أعطت Bf-stIII و Bf-stV أعلى القيم ثم Bf-stII وBf-stII بينما كانت Bf-stIV أقلها ثم Bf-stIII و(Bf-stIII-Bf-stIV).
فيما يتعلق بالخوخ وبعد أربعة أسابيع تم تقديرالنسبة المئوية للبقاء وعدد الأفرع و طول النمو الخضري، حيث أعطت MG-stII أعلى القيم ثم MG-stII و (MG-stI-MG-stII) بينما كان MG-stIV أقلها ثمMG-stIV و MG-stIV.
وبشكل عام فقد كشفت البيانات مجتمعة أن السلالات البذرية لأصول الكمثرى والخوخ أكثر تحملاً للإجهاد الملحي) كلوريد الصوديوم).
ب. الاستجابات الفسيولوجية معملياً لاجهاد الملوحة
تمت مقارنة القياسات الفسيولوجية معملياً للسلالات البذرية لأصل الكمثرى والخوخ التى نمت لمدة أربعة أسابيع في مستويات مختلفة من الإجهاد بالملوحة مع مثيلاتها بدون ملوحة.
- لوحظ نقص محتوى الكلوروفيل أ و ب والكاروتينات في الأوراق استجابة لكلوريد الصوديوم. وقد أظهروا بعض الاستجابة بدرجات مختلفة لتحمل الإجهاد من خلال ظهور زيادة في إجمالي مضادات الأكسدة.
- تم زيادة الفينولات الإجمالية، ومجموع الفلافونويد ومحتويات فيتامين C مع زيادة تركيزات كلوريد الصوديوم.
- زادت كمية البرولين زيادة ملحوظة مع زيادة تركيز الملوحة، حتى وصلت إلى أقصى معدل عند أعلى تركيز للملوحة لجميع السلالات.
ج. التعبير الجيني تحت اجهاد الملوحة
كلما زاد تركيز كلوريد الصوديوم زادت كمية البرولين مُشاراً إليه بالتعبير الجينى للبرولين (P5CS) للسلالات البذرية لكل من أصل الكمثرى والخوخ وذلك يقدم معلومات قابلة للتطبيق لفهم مستوى التحمل لهذه السلالات، وعن الدور المهم لجين P5CS في الاستجابة لتوتر الملوحة وقد أثبتت النتائج الوراثية أن التعبير عن جين P5CS مهم في تكيف السلالات البذرية لأصل الكمثرى والخوخ تحت ظروف الإجهاد.