Search In this Thesis
   Search In this Thesis  
العنوان
Platelet rich plasma preparation using three different centrifugation methods :
المؤلف
Mahmoud, Randa SeifELnaser Ahmed.
هيئة الاعداد
باحث / رندا سيف النصر احمد محمود
مشرف / أسامة حسين القاضي
مشرف / دعاء محمد عبده
مشرف / أسامة حسين القاضي
الموضوع
Centrifugation. Centrifugation methods.
تاريخ النشر
2020.
عدد الصفحات
109 p. ;
اللغة
الإنجليزية
الدرجة
ماجستير
التخصص
الأمراض الجلدية
تاريخ الإجازة
1/1/2020
مكان الإجازة
جامعة بنها - كلية طب بشري - الجلديه والتناسليه
الفهرس
Only 14 pages are availabe for public view

from 109

from 109

Abstract

البلازما الغنيه بالصفائح الدمويه مصطلح شائع وهو ”تركيز الصفائح الدمويه الذاتيه في حجم صغير من البلازما ” وتعتبر مصدرا غنيا لعوامل النمو الذاتيه, وعوامل النمو المختلفة الموجودة في البلازما الغنيه بالصفائح الدمويه هى: عامل النمو المشتق من الصفيحات وعامل النمو المحول بيتا وعامل نمو بطانه الاوعيه الدمويه وعامل نمو البطانه الوعائيه وعوامل نمو البشره وعامل الصفيحات ٤ وعامل النمو شبيه الانسولين ١ و عامل تكوين الاوعيه الدمويه المشتق من الصفيحات لتكون عنصرا قيما لتعزيز الشفاء.
تمثل البلازما الغنيه بالصفائح الدمويه النهج المعاصر لتجديد الانسجه و في حين ان المدي الطبيعي للصفائح الدمويه في صوره الدم الكامله للفرد السليم هي ١٥٠٠٠٠الي ٤٥٠٠٠٠ صفيحة/ميكرولتر من الدم الكامل, فان تعريف العمل للبلازما المركزة الصفيحية (١٠٠٠٠٠٠ صفيحات/ميكرولتر من تركيز الصفائح الدموية. وبعبارة أخرى ، ينبغي أن يتطور تركيز الصفائح الدموية ليزيد بمقدار٣ إلى ٥ أضعاف عن العدد الطبيعي للحصول علي النتيجه المطلوبه للعلاج.
ووفقا (لنظام تصنيف باو)، يتم تصنيف تركيز الصفيحات إلى ضعيف عندما يكون أقل من العدد الطبيعي و متوسط (١-٤) أضعاف ؛ أكبر من العدد الطبيعي إلى ٧٥٠٠٠٠ صفيحة / ميكروليتر)، مرتفع بزيادة (٤-٦) أضعاف )٧٥٠٠٠٠ الى ١٨٠٠٠٠٠ومرتفع جدا عند الوصول لاكثر من ٦٦ اضعاف العدد الطبيعي. (< ١٨٠٠٠٠٠صفيحة / ميكروليتر( واللذين لديهم تاثير علي الشفاء واستجابات خلويه مختلفه .
والمعروف ان البلازما الغنيه بالصفائح الدمويه تحتوي على مكونات علاجية أخرى مثل كرات الدم البيضاء باختلاف تركيباتها مثل (الخلايا متعددة النواه ،خلايا الحساسيه الخلاية الورميه، الخلايا وحيدة النواه والخلايا الليمفاوية) وكذلك عدد صغير من الخلايا الجذعية المبكرة. بالإضافة إلى مكونات جزيئيه اخر مثل (عوامل النمو) وعائله متنوعه من بروتينات مناعيه.
وقد أثبتت دراسات عديدة أن استخدام اليلازما الغنيه بالصفائح الدمويه الذاتيه في التجديد الخلوي يمثل نهجا امنا وبسيطا وفعالا من حيث التكلفه وان له اثارا ايجابيه على تكاثر الخلايا و تكوين الاوعيه الدمويه وعلي مدار السنوات القليله الماضيه تم الاخذ في الانتباه الي تركيز كرات الدم البيضاء في البلازما الغنيه بالصفيحات وتستخدم البلازما الغنيه بالصفائح وكرات الدم البيضاء في المقام الاول في اصلاح العظام و الغضروف وللكريات البيضاء تاثير قوي على اطلاق محفزات النمو وخاصه عامل النمو المحول بيتا ١ وتعتبر الخلايا العدله وهي خلايا الدم البيضاء المحببه لها دور حاسم في الدفاع عن الكائنات الحية ضد العدوى.
ومع ذلك فان التعبير عن العديد من المركبات الخاصة بالالتهابات الخلويه (السايتوكاينس) و مشتقات الاوكسجين النشط يمكن ان يكون ضار لتكاثر الخلايا الجذعيه وقد أظهرت الدراسات أن خلايا كريات الدم البيضاء يمكن أن تمنع تمايز الخلايا وتحرض على موت الخلايا المبرمج.
وبالنظر في الآثار الضارة للسايتوكينات الصادره من خلايا الدم البيضاء علي تجديد الخلايا اظهرت الدراسات ايضا ان التركيزات العاليه من الكريات البيضاء في البلازما الغنيه بالصفائح الدمويه قد يزيد من مستويات السيتوكينات المؤيدة للالتهابات والتي تشمل (انترلوكين-1بيا ) و (عامل نخر الورم –الفا) وينتج عنها إنتاج انزيمات بروتيازيز مدمرة. ، جنبا إلى جنب مع منع تكوين وزياده تدهور الانسجه.
كما أن فعالية الصفائح الغنيه بالبلازما الغنيه بالصفائح الدمويه يجب أن تعزى إلى التوازن الأمثل بين التأثير البنائي والتاثير الهدمي للسيتوكينات ، وأن مجموعة مناسبة من نسب الصفيحات / نسب الكريات البيضاء ستكون مفيدة لتجديد الأنسجة حيث تتاثر عوامل النمو وتركيز السايتوكين بالمحتوي الخلوي للبلازما الغنيه بالصفائح.
فالصفائح الدمويه تزيد الاشارات المنشطه وفي المقابل تزيد كرات الدم البيضاء من اشارات الهدم ويجب تحليل البلازما الغنية بالصفيحات لمحتوىها الخلوي من الصفائح الدموية والكريات الدم البيضاء حيث يمكن أن يؤثر كلاهما على التأثيرات البيولوجية للبلازما الغنيه بالصفائح الدمويه.
الهدف من هذه الدراسة
تحديد افضل الطرق لتحضير البلازما المركزه بالصفائح باعلي استرداد للصفائح الدمويه مع خفض نسبه كرات الدم الحمراء وكرات الدم البيضاء.
قياس نسبه عوامل النمو مثل(عامل النمو البطاني الوعائي وعامل النمو المشتق من الصفيحات) وعامل الهدم مثل ( قيمه مصفوفة ميتالوبروتيناز٩)
المرضى والطرق المستخدمة
تشمل هذه الدراسة ٣٠ متطوعاً إنساناً صحياً (ذكور وإناث تتراوح أعمارهم بين١٧ الى ٤٩)، يتم اختيارهم من عيادة المرضى الخارجيه في قسم الأمراض الجلدية والتناسلية في جامعة بنها . إجراءات الفصل والفحص العملي أجريت في قسم الأمراض السريرية والكيميائية ، جامعة القاهرة. سيتم الحصول على الموافقات المكتوبة والمستنيرة من جميع المشاركين. وستتولى لجنة الأخلاقيات هذه الدراسة التي تشمل أبحاثًا بشرية لأعضاء هيئة التدريس في جامعة بنها.
نوع الدراسه :
دراسة مقارنة الحالات والشواهد .
2 دراسة التجريبية المختبرية .
معايير الاشتمال
عمر المريض من ١٧ إلى ٤٩ سنة.
سليم صحيا وليس لديه عادات التدخين او شرب الكحول.
لا يتعاطي أي دواء ، بما في ذلك الأسبرين وغيرها من العقاقير المضادة للالتهابات.
معايير الاستبعاد
مريض و له تاريخ طبي للأمراض ذات صلة (التي تؤثر على تركيز عوامل النمو على سبيل المثال فشل الكبد).
استهلاك أي دواء معروف للتأثير على وظيفة الصفائح الدموية أو التركيز لمدة ۲١ ومًا قبل جمع الدم.
الطرق المستخدمة
1. التاريخ الكامل: بما في ذلك التاريخ الشخصي ، او امراض بالدم او امراض ذات الصلة بأمراض الدم أو تناول العقاقير.
2. الفحص السريري: الفحص الشامل الكامل لأي مرض دموي قد يؤثر على المرضى.
3. أخذ العينات: ۲٠ مل من الدم الوريدي يتم جمعها من كل واحد متطوع تحت إجراءات وقائية معقمة كاملة وتوزيعها على النحو التالي:
ا- سيتم اخذ ۲مللى علي اديتا لقياس صوره دم كامله.
ب- ١٨ مللي من حجم الدم علي حمض السترات دكستروز (۲ مللي حمض الستريت دكستروز \ ١٨ مللي دم) تختلط بلطف لتحضير البلازما الغنيه بالصفائح الدمويه بواسطه قوي طرد مركزي مختلفه من نموزج مانح واحد لتقليل المتغيرات الخلطيه المحتمله.
4- التحقيقات المختبرية والتحاليل الاحصائيه :
ا. صورة الدم كاملة باستخدام محلل الدم التلقائي في مختبر المستشفى لتحديد تركيز كريات الدم الحمراء والكريات البيضاء والصفائح الدموية في الدم كله، و(البلازما التي تحتوي على الصفائح المركزه) التي تم الحصول عليها بواسطة الطرق المختلفة.
وقد خلصت الدراسه الحاليه الي ما يلي :
في حدود هذه الدراسة ، يمكن استنتاج أن طريقة الطرد المركزي المنخفض الدوران علي مرحلتين ١٠٠٠ دورة في الدقيقة لمدة٤ دقائق في خطوة الطرد المركزي الأولى و ٨٠٠ دورة في الدقيقة لمدة ١٠ دقائق في خطوة الطرد المركزي الثانية و طريقة الدوران الفردي ٩٤٥ دورة في الدقيقة ,مع إزالة الطبقة اللتي تحتوي علي اكبر قدر من كرات الدم البيضاء كخطوة مهمه في التحضير، واحده من الطرق المثلي لتحضير البلازما الغتيه بالصفائح الدمويه للاستخدام العملي حيث يتم التقاط الصفائح الدموية وعوامل النمو بشكل أكثر كفاءة مقارنةً بـطريقة تحضير البلازما باستخدام قوى الطرد المركزي العالية .
تظهر النتائج قيمه عاليه و ذات اهميه لكل من عامل النمو البطاني الوعائي(VEGF) وعامل النمو المشتق من الصفيحات (PDGF)وقيمه منخفضه ذات اهميه لعامل الهدم مصفوفة ميتالوبروتيناز٩ (MMP-9)في الثلاثه طرق المختلفه للفصل, ومع ذلك فأن اعلي قيمه لعامل النمو البطاني الوعائي و عامل النمو المشتق من الصفيحات واقل قيمه مصفوفة ميتالوبروتيناز٩ عند اسنخدام الطريقه الاولي للفصل لانها تحافظ على سلامة الصفائح الدموية ، حتى يتم تفعيل وإزالة حبيبات عوامل النمو للحصول على أكبر قدر منها.