الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 138 |  |  |
| | | from | 138 | | |
Abstract
دراسات تكميلية علي عدوي النيوكاسل في قطعان بداري التسمينلا يزال مرض نيوكاسل (ND) ، الناجم عن فيروس مرض نيوكاسل (NDV) ، أحد أكثر الأمراض الفيروسية المدمرة للدواجن في جميع أنحاء العالم. يعتبر النوع الجينى 7 (VII.1.1 ) من النمط الجيني الفرعي VII.1 من الفئة NDV-II أحد أكثر الأنماط الجينية شيوعًا و التي تسبب العديد من الفاشيات في إفريقيا وآسيا وأوروبا وأمريكا الجنوبية. و على الرغم من استخدام لقاحات النيوكاسل التجارية الحية والمعطلة على نطاق واسع مع أنظمة متعددة ، والتي تكون في الغالب من الأنماط الجينية الأولى والثانية ، لا يتم منع افراز الفيروس من الطيور المصابة فى المزارع ، على الرغم من أن اللقاحات يمكن أن تحمي الدجاج كليًا أو جزئيًا من الوفيات والعلامات السريرية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن تدابير الأمن الحيوي الضعيفة في الدواجن الصغيرة والتي يتم تربيتها منزليا تجعلها عرضة للتعرض المتكرر للأمراض المعدية ، بما في ذلك فيروس النيوكاسل.
لذلك ، أجريت الدراسة الحالية لرصد سلالات النيوكاسل الموجودة حاليًا وتقييم فعالية لقاحات النيوكاسل المؤتلفة (recombinant GVII.1.1-based vaccines) والمتاحة تجاريًا في أنظمة التطعيم المعزز لحماية الدجاج اللاحم من الأصابة بعترات النيوكاسل من النمط الجينى السابع (GVII.1.1 NDV) .
لتوصيف سلالات النيوكاسل ، تم جمع عينات من 12 قطيع من قطعان الدواجن التجارية من مختلف الأعمار (محصنة وغير محصنة ضد مرض النيوكاسل) و التي كانت تعاني من اصابات الجهاز التنفسي و بعلامات سريرية لعدوى النيوكاسل. تم جمع عينات الأنسجة من الرئتين, اللوزتين, الأعور, الطحال, المخ, القصبة الهوائية والمعدة الغدية من قطعان الدجاج المشتبه في إصابتها بمرض النيوكاسل بمعدل خمسة دجاجات مريضة أو ميتة حديثًا من كل قطيع للكشف عن الفيروس وعزله.
تم إجراء الكشف عن الفيروسات باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل (RT-PCR) على الحمض النووي الريبي المستخرج من الأنسجة. ثم تم حقن العينات الحقلية الإيجابية لفيروس النيوكاسل المعزول عن طريق الحقن على الكيس السقائي لبيض الدجاج الجنيني الخالي من مسببات الأمراض (SPF-ECE).و تم عمل تفاعل البلمرة المتسلسل لكامل جينات F من الفيروس لتوصيف العترات المعزولة. من بين 12 عينة تم حقنها في البيض، أظهرت ثماني عينات نتائج إيجابية لـ اختبار التلازن الدموى بعد موت الأجنة خلال 48-96 ساعة بعد التلقيح. تراوحت عيارات اختبار التلازن الدموى للفيروسات المعزولة بين 5-8 لوغاريتم 2. تم تثبيط جميع سوائل allantoic إيجابية HA بواسطة مصل مضاد خاص بفيروس النيوكاسل.
أظهر التحليل الوراثي أن العزلات الثلاثة مرتبطة بسلالات النيوكاسل المصرية و التى تنتمي إلى النمط الوراثي السابع بناءً على التتابع الجينى الكامل للجين F لثلاث عزلات (اثنان من قطعان الدجاج التجارية الصغيرة وواحد من قطعان التربية المنزلية). و أظهر تتابع النوكليوتيد وتسلسل الأحماض الأمينية المستخلصة أن المعزولات من المزارع الصغيرة تحتوي على 98-99.5 و 99-99.6٪ نيوكليوتيد وأحماض أمينية متطابقة مع معزولات النيوكاسل الحديثة ، على التوالي. ومع ذلك ، فإن العزلة من دواجن التربية المنزلية أظهرت 97.3-98.5 و 98.8-99.6٪ نيوكليوتيد وأحماض أمينية متطابقة لنفس المعزولات الحديثة. على الرغم من أن معزولة دواجن التربية المنزلية كانت مطابقة بنسبة 98.3٪ لتلك المعزولة من المزارع الصغيرة ، إلا أنها أظهرت هوية بنسبة 99.2٪ على مستوى الأحماض الأمينية. أظهر تحليل جين F ثباتا في معظم المجالات باستثناء تكرار (Heptad-HRb) ، حيث أظهرت معزولة المزارع الصغيرة تغيرًا في الأحماض الأمينية لـ S278P. كما لوحظ تغييران إضافيان في الموضع 442 (A / T) و 317 (A / S) في عزلة قطعان الدجاج التجارية الصغيرة التربية المنزلية ، على التوالي.
حددت دراسة توصيف الفيروس ثلاث معزولات ضارية من فيروس النيوكاسل من دجاج التسمين التجاري الذي يتم تربيته في منشآت صغيرة أو دجاج التربية المنزلية تنتمي إلى النمط الجينى السابع (VII.1.1). و أظهرت الدراسة أن تغييرات الأحماض الأمينية في الجين F تستدعي الحاجة إلى المراقبة المستمرة للفيروس في القطاعات المتنامية من قطعان الدواجن الصغيرة وقطعان التربية المنزلية في مصر مع الأخذ في الاعتبار أهميتها كموقع لانتشار الفيروس وتطوره.
هدفت الدراسة الثانية إلى تقييم فعالية اللقاحات التقليدية و المؤتلفة من النمط الجينى السابع ,الحية منها والمعطلة, في دجاج التسمين التجاري باستخدام برامج مختلفة. تم تحصين المجموعات التجريبية في اليوم السابع واليوم 21 من العمر بلقاحات حية من نفس نوع اللقاح باستخدام لقاح من النوع الجينى 2 (GII LaSota) ” و مجموعات أخرى باستخدام لقاحين مؤتلفين من النمط الجينى السابع (GVII vaccine (A)- GVII vaccine (B)) عن طريق التقطير فى العين. و تلقت مجموعات مماثلة جرعة واحدة من اللقاحات المناظرة المعطلة تحت الجلد في اليوم السابع من العمر. تم تقييم فعالية اللقاح بناءً على المناعة الدموية ، والحماية الأكلينيكية ، وتقليل إفراز الفيروس بعد التحدي باستخدام عترةضارية من فيروس النيوكاسل.
في جميع المجموعات ، لم يتجاوز عيار مستوى المناعة الدموية باستخدام اختبار تلازن الدم العكسى 4,5 لوغاريتم 2 في كلا العمرين باستثناء Vaccine-B G7 LI / L الذي أظهر عيار أجسام مضادة 6.2 ± 1.03 لوغاريتم 2 في عمر 31 يومًا. في اليوم الحادي والثلاثين من العمر ، تمت عدوى الطيور بعترة فيروس نيوكاسل ضارية بالجرعة الموصى بها106 EID50 /0.1 مل عن طريق الأنف. أظهرت جميع طيور مجموعة التحكم في التحدي علامات سريرية نموذجية لـمرض النيوكاسل وماتت فى خلال 6أيام بعد العدوى. أظهرت النتائج أن مستوى الحماية كان 93.3٪ في المجموعات الملقحة من نوع LaSota (G2 & G3) ، ومع ذلك ، فإن مستويات الحماية المقدرة الناتجة عن اللقاح المؤتلف (vaccine (A) GVII L/L) و (vaccine (A) GVII LI/L) كانت 80٪ و 86.6٪ على التوالي. من ناحية أخرى ، كانت مستويات الحماية التي تم الحصول عليها باللقاح المؤتلف (vaccine (B) GVII L/L) و (vaccine (B) GVII LI/L 93٪ و 100٪ ، على التوالي.
في جميع المجموعات التي تم تلقيحها ، كان الحد من عيار افراز الفيروس معنويًا عند 3 أيام بعد اختبار التحدي, ومع ذلك ، كانت جميع المسحات التي تم جمعها إيجابية بواسطة اختبار تفاعل البلمرة العكسى الكمى (RT-qPCR) كما كان عدد الطيور المفرزة للفيروس أقل في معظم المجموعات المحصنة فى اليوم السابع بعد العدوى. و توقف إفراز الفيروس تمامًا في اللقاح المؤتلف (vaccine (A) GVII LI/L) وكلا مجموعتى اللقاح المؤتلف (vaccine (B) GVII) فى اليوم العاشر بعد العدوى. على الرغم من أن اللقاحات المستندة إلى النمط الجينى الثانى (LaSota GII) تحمي الطيور اكلينيكيا ، إلا أن افراز الفيروس استمر حتى اليوم العاشر بعد العدوى.
سلطت دراسة التحدي مزيدًا من الضوء على الحماية غير الكافية للقاحات التقليدية الحية والمعطلة من النمط الجينى الثانى (NDV-GII). كما أكدت الدراسة أيضًا على أهمية الجمع بين اللقاحات الحية والمعطلة من لقاحات النمط السابع المؤتلفة في برامج تطعيم الدجاج اللاحم للحصول على الحماية ضد العلامات السريرية والوفيات المرتبطة بـمرض النيوكاسل. ومع ذلك ، تشير النتائج أيضًا إلى أن اللقاحات التي تم تطويرها من النمط الجينى السابع (rNDV GVII 1.1.) المحملة على سلالات (VG\GA) قللت افراز الفيروس بشكل أفضل لذلك فان المزيد من الدراسات مطلوبة لمقارنة الاستجابات المناعية للقاحات النيوكاسل المؤتلفة و المطورة من النمط الجينى السابع بشكل أكثر تفصيلا. و أخيرا فإن الدراسة أكدت مطابقة التطعيم مع فيروسات الحقل يقلل بشكل كبير من انتشار فيروس النيوكاسل وبالتالي خطر التطور الفيروسي.