الفهرس 
Chapter 1: General IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 99 |  |  |
| | | from | 99 | | |
Abstract
مرض الحمى القلاعية هو مرض فيروسى شديد العدوى وعابر للحدود يصيب الحيوانات مشقوقة الظلف. ولقد توطن فيروس مرض الحمى القلاعية فى مصر منذ عام 1958. هذا و ينتشر الفيروس فى مصرعلى شكل ثلاثة أنماط مصلية ، مع أنماط علوية وسلالات مختلفة ( O, A, and SAT-2). وتتضمن الأنماط المصلية المسجلة من الفيروس فى مصر من النمط المصلى O على نمطين علويين ، النمط العلوي للشرق الأوسط وجنوب آسيا (ME-SA) ويتضمن سلالتين (Pan-Asia-2 و Sharquia-72) ,والنمط العلوى لشرق إفريقيا 3 (EA-3) والذى يتضمن ثلاثة سلالات Qal-13) ، Ism-16 ، و Alex-17), بينما ينتشر النمط المصلي A تحت نمطين علويين ، النمط العلوى الأفريقي Africa) Topotype) ويتضمن سلالتين (G-VII و G-IV) والنمط العلوى الاسيوى( (Topotype Asia ، ويتضمن السلالة (Iran-05), و النمط المصلي SAT-2 متواجد على شكل نمط علوى واحد (Topotype VII) ويتضمن ثلاثة سلالات (Ghb-12 ، Alx-12 ، Lib-12).
وقد أشتملت الدراسة الحالية على ما يلى:
تم جمع عينات من الغشاء الطلائى للسان والسوائل الحويصلية من محافظة بورسعيد في عام 2020 (عدد 20) ومحافظة القليوبية في عام 2021 (عدد 30) من مزارع الأبقار والجاموس محتملة الاصابة بمرض الحمى القلاعية حيث كانت تعانى من الحمى وسيلان اللعاب والعرج والثوران الحويصلي فى تجويف الفم, اللسان ، بين الاظلاف فى القدمين ، وحلمات الضرع فى الاناث ، بالرغم من ان هذه الحيوانات فى محافظة بورسعيد كانت محصنة بلقاح مرض الحمى القلاعية المحلى الميت متعدد العترات قبل الاصابة( O Pan-Asia-2, A Iran-05, SAT-2 Ghb-2012, and, SAT-2 Lib-2018)
اظهرت تجارب عزل الفيرس على خلايا كلى اليربوع السوري BHK-21)) من خلال ثلات تمريرات متتالية ان سبع عينات من عشرين عينة من محافظة بورسعيد وست عينات من ثلاثين عينة من محافظة القليوبية اظهرت تاثير خلوى مميز لفيروس مرض الحمى القلاعية( CPE) وذلك خلال 24-72 ساعة من اصابة الفيروس للخلايا. وكان المعيار المعدى (infectivity titer) للفيروسات المعزولة يترواح من 5-6 و 7-8 لعترات اللقاح ( log10TCID50 ml). تم استخلاص الحمض النووى للفيروسات المعزولة وعترات اللقاح وتم استهداف منطقة VP1 للكشف عن الانماط المصلية للفيروسات باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل.
كشف اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل (RT-PCR)المستند إلى VP1 أن الفيروسات السبعة المعزولة من محافظة بورسعيد كانت من النمط المصلي A ، والفيروسات الستة المعزولة من محافظة القليوبية كانت من النمط المصلي O ، وكانت عترات اللقاح الأربعة واحدة للنمط المصلي O ، وواحدة للنمط المصلي A ، و اثنان للنمط المصلي SAT-2 . تم تنقية نواتج تفاعل البلمرة المتسلسل لاستخدامها فى معرفة التتابع النتيوكلونيدى للفيروسات المعزولة من الحقل وعترات اللقاح( Sequencing) .
كشفت تحاليل الشجرة الجينية للفيروسات المعزولة من محافظة بورسعيد انها تنتمى الى النمط المصلي A من النمط العلوى لأفريقيا( Topotype Africa) التابع لسلالة Genotype IV (OM681357) ، بينما تم تصنيف
عترة اللقاح انها تنتمى الى النمط المصلى Aالتابع للنمط العلوى الاسيوى (Topotype Asia) من سلالة (Iran-05) (OM681356). كما تبين ان يوجد فرق فى التتابع النيوكلوتيدى بنسبة 26.34% بين المعزولات الحقلية والعترة المستخدمة فى اللقاح ويوجد ايضا اختلاف كبير فى تركيب الأحماض الأمينية المتواجدة فى المواقع الأنتيجينية فى VP1 وتتمثل فى G-H loop(141-160) و Carboxy-terminal end(200-213) بناءا على هذه النتائج قام معهد بحوث الامصال واللقاحات البيطرية بانتاج لقاح اضطرارى احادى ميت يحتوى على هذه المعزولة الحقلية حديثا ومن ثم تم دمج هذه العترة الى العترات المستخدمة فى انتاج اللقاح . كما تبين ان الفيروس الحقلى المعزول يشابه بنسبة 93.61% للتتابع النيوكلوتيدى لفيروس مرض الحمى القلاعية ذات النمط المصلى A المعزول سابقا من السودان فى عام 2018(MK422591.1), كما يشابه بنسبة 93.18% فيروس مرض الحمى القلاعية ذات النمط المصلى A المعزول سابقا من دولة اثيوبيا عام 2015 (MN987497.1) وهذا يشير على احتمالية دخول الفيروس عبر الحدود.
كما أظهرت تحاليل الشجرة الجينية للفيروسات المعزولة من محافظة القليوبية عام 2021 انها تنتمى للنمط المصلى O التابع للنمط العلوى لشرق افريقا 3 (Topotype East Africa-3)التابع لسلالةAlx-17 (OM681353) واظهرت النتائج انه يوجد اختلاف نيكلوتيدى بنسبة 15.28% بين هذه المعزولات وبين عترة اللقاح التى تنتمى للنمط المصلى O التابع للنمط العلوي للشرق الاوسط- وجنوب اسيا (ME-SA) التابع لسلالة Pan-Asia-2 .(OK642671.1)كما ان هذه المعزولات الحقلية تشابه التتابع النيوكلوتيدى بنسبة 98.72% للمعزولات الحقلية السابقة ذات النمط المصلى O من السودان (MK422569.1) وإثيوبيا (MN987453.1) خلال عام 2017 ويمكن أن تُعزى هذه النتيجة إلى دخول الفيروس عبر الحدود.
تم قياس كميةS 146 الأنتيجينية الخاصة بـفيروس مرض الحمى القلاعية الميت باستخدام تقنية الطرد المركزي الفائق المتدرج لكثافة السكروز (SDG) ، وتم فحص تأثيرات الأس الهيدروجيني ودرجات الحرارة المختلفة على تفكك S146، تم استخدم السكروز والجلسرين بتركيزات مختلفة(5%, 10%, and 20%) كمثبتات لتأخير التفكك من الانتيجينكS 146 إلى الاقل انتيجينكS 12 ، وتقييم الاستجابة المناعية باستخدام اختبار المصل المتعادل لمحتويات مختلفة منS 146 من لقاح الحمى القلاعية المحضر الميت ثلاثى العترات(O Pan-Asia-2, A Iran 05 and SAT-2/Ghb-12) .
أظهرت النتائج أن الأس الهيدروجيني الأكثر ثباتًا للانتيجن S146 كان بين 7.5 و 8 كما لاحظنا تكسيرا سريعا فى كمية S146 عند الاس الهيدروجينى 6 و 6.5 . وان درجة الحراة المناسبة لل S 146 عند 4°C بينا يحصل تكسير كامل لها عند درجة حرارة 56 °C فى خلال دقائق ولكن تبين ان إضافة 20 ٪ من السكروز أو الجلسرين كمثبت يمكن زيادة فترة عمر النصف لـ S 146 عند 45 °C من 30 دقيقة إلى أكثر من 3 أيام.
استخدم اختبار المصل المتعادل لقياس العيارات المناعية للحيوانات المحصنة واصبحت العيارات المناعية واقية للحيوانات المحصنة بجرعة (6 ميكروجرام S146 |عترة|جرعة) بعد الاسبوع الثانى من التحصين وكانت 1.875, 1.95, و 1.8 لعترات اللقاح (O Pan Asia-2, A Iran 05 and SAT-2\Ghb-12) على التوالى وظلت العيارات المناعية واقية حتى الاسبوع 34, 38,و 32 بعد التحصين لعترات اللقاح (O Pan Asia-2, A Iran 05 and SAT-2\Ghb-12) على التوالى . بينا الحيوانات المحصنة بجرعة (4 ميكروجرام S146 |عترة|جرعة) اصبحت العيارات المناعية واقية بعد الاسبوع الثانى من التحصين وكانت 1.725, 1.8, و 1.65 لعترات اللقاح (O Pan Asia-2, A Iran 05 and SAT-2/Ghb-12) على التوالى وظلت العيارات المناعية
واقية حتى الاسبوع 28,26, و 22 بعد التحصين لعترات اللقاح ((O Pan Asia-2, A Iran 05 and SAT-2\Ghb-12 . اما الحيوانات المحصنة بجرعة (2 ميكروجرام S146 |عترة|جرعة) اصبحت العيارات المناعية واقية بعد الاسبوع االثالث من التحصين وكانت 65. 1., 1.725, و 1.65 لعترات اللقاح (O Pan Asia-2, A Iran 05 and SAT-2/Ghb-12) على التوالى وظلت العيارت المناعية واقية حتى الاسبوع 14, 16, و12 بعد التحصين لعترات اللقاح ((O Pan Asia-2, A Iran 05 and SAT-2\Ghb-12 .
توصيات هذه الدراسة ان الحد الأدنى من المحتوى الانتيجينى S 146 لعترات فيروس مرض الحمى القلاعية (O Pan-Asia-2, A Iran 05 and SAT-2/Ghb-12) يجب ألا تقل عن (4 ميكروغرام / عترة /جرعة) لإنتاج لقاح ثلاثى عالى الكفاءة, اضافة النمط المصلى A من النمط العلوى لافريقيا من السلالة G-IV)) الى العترات المستخدمة للقاح A-Africa topotype, Genotype IV)) و المزيد من دراسات المطابقة التبادلية (R-value) ودراسات التحدى بين الفيروسات للنمط المصلى O التابع للنمط العلوى لشرق افريقيا 3( EA-3) وبين عترة اللقاح التى تنتمى للنمط المصلى Oالتابع للنمط العلوي للشرق الاوسط- وجنوب اسيا(ME-SA) التابع لسلالة Pan-Asia-2 والبحث عن انتاج لقاحات اكثر ثباتا لفيروس مرض الحمى القلاعية حتى تتحمل الظروف الغير مناسبة لنقل وتخرين اللقاح واثناء حملات التحصين.