الفهرس 
Rep -PCR analysisOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 104 |  |  |
| | | from | 104 | | |
Abstract
تم اجراء هذا البحث بمعمل قسم الوراثة - كلية الزراعة - جامعة المنوفية، وتم تنفيذه لتحديد الاختلافات الوراثية ودراسة كفاءة العلاقة التكافلية في 25 عزلة من بكتيريا الرايزوبيوم مع النباتات البقولية وخاصة نبات الفول.
تم تجميع عزلات الرايزوبيوم ليجيومينوزارم من العقد الجذريه في جذور نبات الفول البلدى من أماكن مختلفة داخل محافظة المنوفية وهي (شبين الكوم- تلا-بركة السبع-أشمون-منوف-الشهداء-قويسنا-الباجور-مدينة السادات).
تتلخص الدراسة في ستة أهداف وهي:
1- عزل بكتريا الرايزوبيا وتوصيف هذه العزلات مظهريا.
2- توصيف العزلات على مستوي الكيمياء الحيوية.
3- دراسه علاقة القرابه بين العزلات المدروسه بإستخدام جين ال16S rRNA وذلك بقياس تتابعات النيوكليوتيدات علي مستوي جينات الريبوسوم في جميع العزلات المدروسة.
4- دراسة مدي الاختلافات الوراثية على مستوي الجينوم البكتيري بين العزلات تحت الدراسة (باستخدام العناصر المكررة) باستخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل والتي تعرف بـ (rep-PCR).
5- اكثار جين ال nifH بين العزلات المختارة باستخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل.
6- قياس كفاءة تثبيت الازوت الجوي بين العزلات المختارة عن طريق اجراء تجربة حقلية في الاصص.
ويمكن ايجاز النتائج المتحصل عليها فيما يلي:
جميع الاختبارات المظهريه التى تم إجراؤها أثيتت ان جميع العزلات تتبع بكتريا الرايزوبيا، وكانت جميعها سالبه لصبغه جرام، لها القدره على الحركه وعصويه الشكل. كما أظهرت العزلات المدروسه إستجابات مختلفه على مستوى الاختبارات البيوكيميائيه، فعلي سبيل المثال اختبار الاستجابة للمضادات الحيوية – درجة الحموضة – تركيز ملح كلوريد الصوديوم - مصادر الكربون و
تتضمن ما يلي: (الجلوكوز، الفركتوز، السكروز، اللاكتوز، السوربيتول، المانوز وكذلك المالتوز).
وشملت المضادات الحيوية علي: ((AM-10)، Ofloxacin (OFX-5)، Clindamycin (DA-2) ,Trimethoprim / sulphamethoxazole (SXT-25), Cloxacillin (CX-1), Tobramycin (TOB-10), Meropenem (MEM-10), Amoxycillin / Clavulanic acid (AMC-30), Rifamycin (RF-30), Cephalexin (CL-30), Oxacillin (OX-1), Gentamicin (CN-10), Streptomycin (S-10), Imipenem (IPM-10) and Chloramphenicol (C-30) .
وتضمن درجات الحموضة: (4 , 5 , 6 و8).
وشملت التركيزات المختلفة لملح كلوريد الصوديوم علي: (0.5 – 1 – 2 و 4).
وعند دراسه درجة القرابة على المستوي الجزيئي بين العزلات تم عزل جين16SrRNA فى كل منهم وللحصول على كميه مناسبه من DNA تم استخدام PCR وقد توصلنا الي قطع ال DNA التى تحدد تواليات القواعد واتضح ان كلا منهم أظهر حجم متساوي يقدر بـ 1500 زوج من القواعد.
كما تم تحليل تتابعات القواعد للعزلات تحت الدراسه بالاضافه الى مقارنتها بالتتابعات للسلالات المعروفه فى بنك الجينات عن طريق Blast neoclutide. حيث وصلت نسبه التشابه بين عزلات الفول البلدى والسلالات المعروفه فى بنك الجينات الى 99%. وكذا تم الحصول لكل منهم على Accession number بالإضافة الي مقارنه تتابعات القواعد الازوتيه فى ال DNA المعزول من بكتريا العقد الجذريه تم الوصول الي أن جميع العزلات تتبع Rhizobium leguminosarum كما هو متوقع.
وقد تم اكثار الجين الخاص بـتثبيت النيتروجين (H) nifH لجميع العزلات بإستخدام تقنية ال PCR وكان الوزن الجزيئي لقطع الاكثار في جميع العزلات متساوية (336 أزواج من القواعد).
وقد تم دراسة درجات القرابة بين العزلات من خلال تقنية التواليات المتكررة في الجينوم باستخدام تقنية الـ PCR، وكانت أعلي اختلافات بين العزلات المستخدمة باستخدام البادئ (BOX-A1) وأقلها اختلافا البادئ (rep-16).
وأخيرا قد تم دراسة الكفاءة بين العزلات المدروسة ودراسة مدي الاختلافات بينهم بإجراء تجربة حقلية بزراعة نبات الفول البلدي في الاصص بالحقن بالرايزوبيوم وقد تم تحديد اعلي نسبة تكافل في العزلة رقم 21 (169.3) وأقل نسبة تكافل في العزلة رقم12 (78.46).