الفهرس 
List of ContentsOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 132 |  |  |
| | | from | 132 | | |
Abstract
يعد سرطان الكبد واحدًا من أكثر الأورام الخبيثة شيوعًا في جميع أنحاء العالم حيث يحتل المركز الخامس بين انواع السرطانات المسببة للموت فى العالم حيث يتم تشخيص 70000 حالة سرطان كبد جديدة سنويا. يحدث سرطان الكبد عادة فى حالات الكبد المتليف ولكن هناك عوامل تساهم في إحداث هذا المرض وأهمها فيروسات الكبد بى وسى وداء الكبد الكحولى ومرض الكبد الدهنى الغير كحولى.
ونظرا لمضاعفات العلاج الكيمائى والإشعاعى فى علاج السرطانات فكانت الحاجة لاتجاه الباحثين لإيجاد بدائل لمثل هذه العلاجات كعوامل وقائية وكمضادات للاكسدة وهي مواد موجودة في الأغذية وبعض المنتجات الطبيعية، حيث تعمل على حماية الجسم من العديد من الأمراض المختلفة .
وقد أجريت هذه الدراسة على عدد32 من ذكور الفئران البيضاء وتتراوح أعمارها من 4-5 أسبوع وأوزانها بين 80- 120 جرام وقد تم تقسيم الجرذان إلى اربع مجموعات متساوية كالأتي:
1) المجموعة الأولي ( المجموعة الضابطة الطبيعية): اشتملت علي7 فئران لم تعط أي أدوية واستخدمت كمجموعة ضابطة للمجموعات الأخرى.
2) المجموعة الثانية ( المجموعة المحدث بها مرض سرطان الكبد): تكونت من7 فئران تم اعطاؤهم داي إيثيل نيتروز أمين عن طريق الحقن فى الغشاء البريتيوني للبطن بتركيز 200 مللي جرام/كيلوجرام مرة واحدة اسبوعيا .وبعد اسبوعين تم اعطائهم مادة رباعى كلوريد الكربون كعامل مسرع فى حدوث سرطان الكبد ايضا عن طريق تجريعهم بالفم بتركيز 3 مللى/كيلوجرام بتخفيف (1:1) مع زيت الذرة مرة واحدة اسبوعيا .وبعد مرور 5 اسابيع من اول حقنة تم تكرار الجرعة مرة اخرى.
3) المجموعة الثالثة (المجموعة العلاجية بمستخلص الزنجبيل): اشتملت على 7 فئران تم اعطاؤهم داي إيثيل نيتروز أمين عن طريق الحقن فى الغشاء البريتيوني للبطن بتركيز 200 مللي جرام/كيلوجرام .وبعد اسبوعين تم اعطائهم مادة رباعى كلوريد الكربون كعامل مسرع فى حدوث سرطان الكبد ايضا عن طريق تجريعهم بالفم بتركيز 3 مللى/كيلوجرام بتخفيف (1:1) مع زيت الذرة .وبعد مرور5اسابيع من اول حقنة تم تكرار الجرعة مرة اخرى.وبعد مرور خمسة عشر اسبوعا من اول حقنة تم علاجهم بمستخلص الجنزبيل عن طريق تجريعهم بالفم بتركيز 300 مجم/كيلوجرام لمدة 6 اسابيع.
4) المجموعة الرابعة (المجموعة العلاجية بجزيئات الزنجبيل النانوية): اشتملت على 7 فئران تم اعطاؤهم داي إيثيل نيتروز أمين عن طريق الحقن فى الغشاء البريتيوني للبطن بتركيز 200 مللي جرام/كيلوجرام .وبعد اسبوعين تم اعطائهم مادة رباعى كلوريد الكربون كعامل مسرع فى حدوث سرطان الكبد ايضا عن طريق تجريعهم بالفم بتركيز 3 مللى/كيلوجرام بتخفيف (1:1) مع زيت الذرة .وبعد مرور شهر من اول حقنة تم تكرار الجرعة مرة اخرى.وبعد مرور خمسة عشر اسبوعا من اول حقنة تم علاجهم بجسيمات الجنزبيل النانومترية عن طريق تجريعهم بالفم بتركيز 50 مجم/كيلوجرام لمدة 6 اسابيع.
العينات:
تم تجميع عينات دم عشوائية وعينات من الأنسجة (الكبد) تم تجميعها من جميع مجموعات الفئران ( الضابطة والمصابة) بعد الأسبوع الثاني والعشرون من بدايه التجربة.
عينات الدم :
تم جمع عينات الدم بعد الصيام طوال فترة الليل من الجيب الوريدي خلف العين في أنابيب نظيفة ، جافة ومعقمة وترك العينة 15 دقيقة حتى تتجلط ثم فصل المصل بواسطة جهاز الطرد المركزي وذلك عند سرعة 3000 لفة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة بعدها تم جمع السيرم في أنابيب جافة ومعقمة بواسطة ماصة اتوماتيكية وتم حفظ المصل في المجمد عند درجة 20˚مئويةتحتالصفروذلكلإجراءالقياسات البيوكيميائية الآتية :(الألانين امين وترانسفيريز،الاسبرتات امينو ترانسفيريز و الفوسفاتيز القلوي).
عينات الانسجة :
بعد الحصول على الكميات الكافية من الدم، تم ذبح الفئران وفتح البطن وفصل الكبد ثم غسله جيداً بمحلول ملح فسيولوجي (0.9%) ثم وضع جزء من أنسجه الكبد ووضعها في أنابيب إيبندورف وتم الاحتفاظ به على الفور في النيتروجين السائل وتخزينها في 80˚تحتالصفرحتىاستخلاصالحمضالنوويالريبوزيلقياسالتعبيرالجينيلكلامن:
الكاسباس-3 ، وعامل سرطان الغدد الليمفاوية بيتا-2 ، و عامل النمو المحول بيتا -1، و عامل النمو الكبدى ، وعامل النمو للحلايا الليفية، وميكرو ار ان ايه 221، و ميكرو ار ان ايه 29، و ميكرو ار ان ايه 34
عينات الهستوباثولوجى:
بعد 21إسبوع من بداية التجربةَ تم الفحص بالعين المجردة لكشف أى تغيرات طرأت على أنسجه الكبد لفئران المجموعات. ثم تم فصل جزء صغير من الكبد وتم حفظه فى محلول فورمالين متعادل 10% ، ثم تم تحضير العينات وصبغها بالصبغات الخاصة ووضعها على الشرائح ووضع الغطاء وتثبيته ، ثم تم فحصها ميكروسكوبياً وتوصيفها وتصويرها عن طريق متخصص فى علم الهستوباثولوجى.
وقد أظهرت النتائج بعد تحليلها إحصائيا الآتي:-
أولا بالنسبة لنتائج التحاليل الكيميائيه الحيوية:-
1- نشاط الألانين أمينوترانسفيريز و الاسبرتات امينو ترانسفيريو والفوسفاتيز القلوي :-
أظهرت النتائج وجود زيادة معنوية في نشاط إنزيم الألانين أمينوترانسفيريز و الاسبرتات امينو ترانسفيريزوالفوسفاتيز القلوي بمصل جرذان المجموعة المحدث بها مرض سرطان الكبد عند مقارنتها بجرذان المجموعة الضابطة الطبيعية.
كما لوحظ حدوث نقص معنوي في نشاط إنزيم الألانين أمينوترانسفيريزو الاسبرتات امينو ترانسفيريز والفوسفاتيز القلوي بمصل فئران كلا من مجموعة مستخلص الجنزبيل وجسيمات الجنزبيل النانومترية العلاجية مقارنة بالمجموعة المصابة بسرطان الكبد.
ثانيا بالنسبة لنتائج التحليل البيولوجي الجزيئي:-
2-الكاسباس -3,سرطان الخلايا االليمفاوية بيتا-2و العامل النووي المنظم متعدد الوظائف المرتبط باريثرويد 2:
أظهرت النتائج وجود نقص معنوى فى مستوى التعبيرالجيني ( الكاسبااس3 ( وسرطان الخلايا الليمفاوية بيتا-2والعامل النووي المنظم متعدد الوظائف المرتبط باريثرويد 2 في نسيج كبد الفئران المحدثبهامرض سرطان الكبد عند مقارنتها بفئران المجموعة الضابطة الطبيعية.
كما أوضحت الدراسة أن المعالجة بامستخلص الجنزبيل و جسيمات الجنزبيل النانومترية للفئران المصابة بمرض سرطان الكبد احدثت زيادة معنوىة فى مستوى التعبير الجينى فى الكاسباس-3وسرطان الخلايا الليمفاوية بيتا-2 و العامل النووي المنظم متعدد الوظائف المرتبط باريثرويد 2(Nrf2 )فى نسيج كبد الفئران وذلك عند مقارنته بالمجموعة المصابة بسرطان الكبد.
4-عامل النمو المحول بيتا-1و عامل النمو الكبدى وعامل النمو للخلايا الليفية:
أظهرت النتائج وجود زيادة معنوية فى مستوى التعبير الجينى في عامل النمو المحول بيتا-1 و عامل النمو الكبدى و عامل النمو للخلايا الليفية فى نسيج كبد الفئران المحدثبهامرض سرطان الكبد عند مقارنتها بجرذان المجموعة الضابطة الطبيعية.
كما أوضحت الدراسة أن المعالجة بمستخلص الجنزبيل وجسيمات الجنزبيل النانومترية للفئران المصابة بمرض سرطان الكبد احدثت نقص معنوى فى مستوى التعبير الجينى فى عامل النمو المحول بيتا -1 فى نسيج كبد الفئران وذلك عند مقارنته بالمجموعة المصابة بسرطان الكبد.
5- ميكرو أر إن أيه 221 :-
أظهرت النتائج وجود زيادة معنوية فى مستوى التعبير الجينى في ميكرو أر إن أيه 221 في نسيج كبد الفئران المحدثبهامرض سرطان الكبد عند مقارنتها بفئران المجموعة الضابطة الطبيعية.
كما أوضحت الدراسة أن المعالجة بمستخلص الجنزبيل وجسيمات الجنزبيل النانومترية للفئران المصابة بمرض سرطان الكبد احدثت نقص معنوى فى مستوى التعبير الجينى فى ميكرو ار ان ايه 221 في نسيج كبد الفئران وذلك عند مقارنته بالمجموعة المصابة بسرطان الكبد.
6- ميكرو أر إن أيه 29و ميكرو ار ان ايه 34:-
أظهرت النتائج وجود نقص معنوي فى مستوى التعبير الجينى في كلا من ميكرو أر إن أيه 29 و ميكرو أر إن أيه 34 في نسيج كبد الفئران المحدثبهامرض سرطان الكبد عند مقارنتها بفئران المجموعة الضابطة الطبيعية.
كما أوضحت الدراسة أن المعالجة بمستخلص الجنزبيل وجسيمات الجنزبيل النانومترية للفئران المصابة بمرض سرطان الكبد احدثت زيادة معنوىة فى مستوى التعبير الجينى فى كلا من ميكرو ار ان ايه 29 و ميكرو ار ان ايه 34في نسيج كبد الفئران وذلك عند مقارنته بالمجموعة المصابة بسرطان الكبد.
7-الحامض النووي (دي ان ايه) و مسارات الهيستون:-
أظهرت النتائج وجود زيادة معنوية فى مستوى التعبير الجينى فيDNMT, HDAC, HAT فى نسيج كبد الفئران المحدث بها مرض سرطان الكبد عند مقارنتها بفئران المجموعة الضابطة الطبيعية.
كما أوضحت الدراسة أن المعالجة بمستحلص الجنزبيل وجسيمات الجنزبيل النانومترية للفئران المصابة بمرض سرطان الكبد احدثت نقص معنوى فى مستوى التعبير الجينى فى HDAC, HAT, DNMT فى نسيج كبد الفئران وذلك عند مقارنته بالمجموعة المصابة بسرطان الكبد.
ثالثا الفحص الهستوباثولوجى لانسجة الكبد:
أظهر الفحص الهستوباثولوجى الأتي:-
المجموعة الأولى :- المجموعة الضابطة الطبيعية:
افاد الفحص الهستوباثولوجي لفئران المجموعة الضابطة عن عدم وجود اي تغييرات مرضية في خلايا الكبد والتي ظهرت بصورة طبيعية .
2- المجموعة الثانية: - (المجموعة المحدث بها سرطان الكبد):
والتي تجرعت داي ايثيل نيتروزو امين وكربون تتراكلوايد فقد ظهرت تشوهات شديدة في حوالي 60-70% في خلايا نسيج الكبد والتي حل محلها خلايا سرطانية لها خصائص الخلايا السرطانية الخبيثة من حيث تغير في احجام واشكال النواه مع وجود بعض الانقسامات الطفيفة كما ظهرت مناطق تنكرز في نسيج الكبد ادت الي اختفاء خلاياه واحلالها ببقايا الخلايا المتنكرزة مختلطة بالفيبرين والانزفه
3- المجموعة الثالثة: (المجموعة العلاجية بمستخلص الزنجبيل):
افاد الفحص الباثولوجي للمجموعة الثالثة والتي تجرعت داي ايثيل نيتروزو امين وكربون تتراكلوايد ثم تم علاجها بمستخلص الجنزبيل عن احتقان في اوعية الكبد مع احتفاظ الاطار العام للنسيج الكبدي بصورته الطبيعة وظهرت خلايا الكبد بها بعض الاستحالات الدهنية والمائية واحيانا ظهرت بؤر سرطانية صغيرة مكونه من خلايا كبد متضخمة بها تغيرات سرطانية في انويتها
4- المجموعة الرابعة: (المجموعة العلاجية بجزيئات الزنجبيل النانوية):
اظهر الفحص الباثولوجي للكبد الفئران التي اعطيت داي ايثيل نيتروزو امين وكربون تتراكلوايد ثم تم علاجها بجسيمات الجنزبيل النانومترية عن ظهور انسجة الكبد بصورة طبيعية مع وجود استحالات مائية في معظم خلاياه وايضا استحالات دهنية في بعض خلايا الكبد الاخري .
التوصية
توصي الدراسة باستخدام مستخلص الزنجبيل وجزيئات الزنجبيل النانوية كوسيلة علاجية لمرض سرطان الكبد علي ان يكون استخدامهما ضمن الجرعات العلاجية الامنة والتي ربما قد تخفف من التاثيرات الخطيرة والغير امنة وتحد من مضاعفات هذا المرض.