الفهرس 
Table of ContentsOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 194 |  |  |
| | | from | 194 | | |
Abstract
الكلوربيريفوس (CPF) هو مبيد حشري واسع النطاق من الفوسفات العضوي، ومن المعروف جيدا أنه يرتبط بالعديد من حالات العجز العصبي وتغير النمو العصبي لدى الأطفال. لا تزال الآليات المرتبطة بهذه التأثيرات غير مفهومة جيدًا. ومع ذلك، هناك أدلة متزايدة على آليات السمية المثيرة للسمية العصبية التي يسببها CPF. مستقبلات الغلوتامات، وتحديداً مستقبلات (NMDAR) ، متورطة بشكل كبير في التاثير السمى للكلوربيريفوس، لذلك كان الهدفان الرئيسيان لهذه الدراسة هما (1) التحقيق في الحساسية التفاضلية للسمية العصبية التي يسببها CPF في مراحل الانتشار والتمايز للدماغ البشري النامي. (2) لتحديد دور NMDAR على السمية العصبية التنموية التي يسببها CPF كآلية جديدة. لدراسة هذه التأثيرات، تم استخدام نموذج زراعة الخلايا الجذعية السلفية العصبية البشرية (ReNcell CX) الذي يحاكي نمو الدماغ البشري. يمكن زراعة خلايا ReNcell CX على أنها طبقة أحادية الطبقة وكغلاف عصبي عائم. ركز الجزء الأول من هذه الدراسة على دراسة تأثير التعرض لـ CPF على قابلية ReNcell CX المستزرعة في ظل ظروف زراعة الخلايا غير المتمايزة والمتمايزة باستخدام 3- (4،5-dimethylthiazol-2-yl) -2،5 diphenyltetrazolium bromide (MTT) فحص صلاحية الخلية. بالإضافة إلى ذلك ، تم التحقيق في تأثير علاج CPF على خلايا ReNcell CX التي نمت كغلاف عصبي عائم حر. هدفت الدراسة بعد ذلك في الجزء الثاني إلى التحقيق في الأدوار التفاضلية لموت الخلايا المبرمج والإجهاد التأكسدي في السمية العصبية التي يسببها CPF في خلايا ReNcell CX غير المتمايزة والمتمايزة ، وذلك باستخدام مزيج من قابلية بقاء الخلايا الحية الميتة و 2 ، 7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate ( DCFDA) ، على التوالي. شرعت الدراسة بعد ذلك في الجزء الثالث للتحقيق في دور NMDAR في السمية العصبية التي يسببها CPF ، لذلك تم التحقيق في تأثير التعرض CPF مع وبدون (Ifenprodil (IFN) على أنواع خلايا ReNcell CX المتمايزة لمدة 4 أسابيع. بالإضافة إلى ذلك ، تمت دراسة التأثير المباشر لـ CPF على التيارات NMDAR باستخدام البويضات Xenopus laevis التي تعبر عن المؤتلف GluN1-1a / GluN2A و GluN1-1a / GluN2B NMDAR وتم تسجيل الاستجابات باستخدام الفيزيولوجيا الكهربية ثنائية الجهد الكهربائي (TEVC). أظهرت خلايا ReNcell CX حساسية تفاضلية للسمية العصبية التي يسببها CPF في مراحل غير متمايزة ومتمايزة من النمو العصبي. بالإضافة إلى ذلك ، ادى التعرض للكلوربيربفوس إلى حد كبير (P = 0.0047) إلى تقليل نمو االخلايا العصبية بطريقة تعتمد على التركيز والوقت. أظهرت نتائج فحص قابلية بقاء الخلايا الحية الميتة أن السمية الخلوية الناتجة عن CPF قد تم إثباتها من خلال الزيادة الملحوظة في عدد الخلايا الميتة في خلايا ReNcell CX غير المتمايزة والمتباينة مع عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية (p> 0.05) ، بينما زادت الخلايا المبرمج بشكل ملحوظ (p <0.001) في الخلايا المتمايزة. ارتبط تعرض CPF أيضًا بمستويات عالية (p 0.01) عالية من تكوين أنواع الأكسجين التفاعلية فقط في خلايا ReNcell CX المتمايزة كما هو موضح في نتائج اختبار DCFDA. تشير هذه البيانات إلى أن السمية العصبية التنموية التي يسببها CPF قد تتبع مسارات مختلفة لإشارات موت الخلية في ظل اطوار مختلفة لنمو الخلايا. تم تخفيف موت الخلايا المبرمج الناجم عن CPF بشكل كبير (P <0.001) عن طريق التطبيق المشترك لـ IFN في خلايا ReNcell CX المتباينة لمدة 4 أسابيع. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت نتائج الفيزيولوجيا الكهربية أن CPF يحفز تيار NMDA / الجلايسين المحفز بتركيزات منخفضة (نانومولار) ، والتي تشبه إلى حد كبير مستويات تركيزه داخل الجسم البشرى. أثار CPF أيضًا بشكل مباشر القيم الحالية بوساطة NMDAR وقيم NMDA EC50 المخفضة بشكل ملحوظ في بويضات Xenopus laevis التي تعبر عن المؤتلف GluN1-1a / GluN2A (p <0.0001) و GluN1-1a / GluN2B NMDAR لوحدات الفرعية (p = 0.002) ، مما يشير إلى أن CPF يعمل كمُعدِّل خيفي إيجابي وناشط جزئي لـ NMDAR من خلال الارتباط بموقع ربط خيفي محدد ، والذي قد يحتاج إلى مزيد من الابحاث. عززت الدراسة الحالية الدليل الحالي على حساسية مرحلة النمو للدماغ البشري للسموم العصبية ، من خلال دراسة تأثير السمية العصبية التي يسببها CPF باستخدام نموذج زراعة خلايا ReNcell CX ذي الصلة بالإنسان. بالإضافة إلى ذلك ، قدمت آلية جديدة للتسمم العصبي الناجم عن CPF ، بما في ذلك تنشييط عمل مستقبلات NMDAR.