الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 191 |  |  |
| | | from | 191 | | |
Abstract
”تهدف الدراسة إلى عزل و تنقية إنزيم اليوريكيز من أوراق نبات الحلبة حيث أظهرت أوراق نبات الحلبة نشاطاَ ملحوظا للإنزيم لذلك تم اختيار نبات الحلبة لفصل وتنقية وتقييد ودراسة الخصائص الكيميوحيوية لإنزيم اليوريكيز و أظهرت الدراسة ما يلى:•تم تنقية الإنزيم من أوراق نبات الحلبة باستخدام 80% كبريتات الأمونيوم وداي إيثيل أمينو إيثيل سليلوز وسيفادكس ج-200 وكان النشاط النوعي للإنزيم 230.76 وحدة لكل مللي جرام بروتين وتم تنقية الإنزيم 133.38 ضعف وكانت إنتاجية الإنزيم من عملية التنقية 2.87%.• أظهرت النتائج من خلال SDS-PAGE أن الإنزيم قد تم تنقيته بنجاح وهذا من خلال ظهور شريط بروتينى واحد للإنزيم المنقى من أوراق الحلبة وكان الوزن الجزيئي 48 كيلو دالتون. •كانت الفترة الزمنية المثلى لنشاط الإنزيم المنقى 15 دقيقة حيث كان النشاط الإنزيمى 23.8 وحدة لكل مللي جرام بروتين والتي تمثل نشاطا بنسبة 264.6%.•ظهرت النتائج أن الرقم الهيدروجيني الأمثل للإنزيم المنقى 8 وكانت درجة الحرارة المثلى 40 درجة مئوية.•تم حساب طاقة التنشيط للإنزيم المنقى باستخدام طريقة أرهينيس حيث كانت 9.6 كيلو جول لكل مول.•بدراسة الثبات الحرارى للإنزيم المنقى عند 60 درجة مئوية تبين أن فترة نصف العمر للإنزيم 47.2 دقيقة وبذلك بدون إضافة أي مركبات لثبات الإنزيم بينما بعد إضافة التريهالوز والساركوسين زادت فترة نصف العمر إلى 55.6 و 66.14 دقيقة على التوالي.•وكان التركيز الأمثل لحمض اليوريك للنشاط الاقصى للإنزيم 1.2 مللي مول حيث كانت 47.62 Vmax وحدة لكل مللي جرام وKm 0.786 مللي مول.•بدراسة تأثير المواد المخلبية مثل ألفا-ألفا-دايبيريديل وفينانثرولين وإيثيلين داى أمين تيتراستيات وإيثيلين جيلكول تيترأستيات تبين أن المركبات الأربعة قد ثبطت الإنزيم المنقى بنسب مختلفة وكانت قيم IC50 هي 9.03 و6.99 و6.17 و6.64 مللى مول على التوالي وهذا التثبيط أثبت أن الإنزيم المنقى يحتوى على أيونات أحدى العناصر.•بدراسة تأثير هرمونات النمو النباتية على الإنزيم المنقى وخاصة الكينيتين وحمض الجاسمونيك وحمض الجبريليك تبين أن المركبات الثلاثة حفزت النشاط الإنزيمى بنسب مختلفة وكان التركيز الأمثل لتحفيز الإنزيم 200 ميكرو مول في وجود الكينيتين و100 ميكرو مول في وجود حمض الجاسمونيك و حمض الجبريليك. •بدراسة تأثير مركبات الكبريت على النشاط الإنزيمى مثل السيستين ون-أستيل سيستين والجلوتاثيون المختزل والثيوجليكولات تبين أن هذه المركبات قد حفزت النشاط الإنزيمى عند التركيزات المنخفضة بينما التركيزات المرتفعة كانت مثبطة وكان التركيز الأمثل لتحفيز الإنزيم المنقى بواسطة السيستين ون-أستيل سيستين والجلوتاثيون المختزل 30 ميكرو مول بينما كان 40 ميكرو مول هو التركيز الأمثل لتحفيز الإنزيم بواسطة الثيوجليكولات.•تم دراسة تأثير أيونات العناصر مشتملة على المنجنيز والكالسيوم والكادميوم والزنك والماغنسيوم والصوديوم في صورة كبريتات على النشاط الإنزيمى بتركيز5 مللى مول وتبين أن أيونات الكالسيوم والماغنسيوم والمنجنيز كانت محفزة للنشاط الإنزيمى بينما كانت أيونات العناصر الأخرى مثبطة للنشاط الإنزيمى وخاصة الكادميوم.•تم دراسة تأثير مركبات الأدينوزين والتى تشمل أدينوزين أحادي الفوسفات وأدينوزين ثنائي الفوسفات وأدينوزين ثلاثي الفوسفات على نشاط اليوريكيز المنقى وتبين أن هذه المركبات كانت محفزة للنشاط الإنزيمى عند التركيزات المنخفضة بينما التركيزات العالية كانت مثبطة وكانت التركيزات المثلى للمركبات الثلاثة لتحفيز الإنزيم 0.4 و0.6 و0.8 مللي مول على التوالي.•تم دراسة تأثير أنهيدريد حمض السكسينك وفوق اوكسيد الهيدروجين على النشاط الإنزيمى وتبين أن كلاهما مثبط للنشاط الإنزيمى وكانت قيم IC50 للمركبين هى 5.85 و5.18 مللي مول على التوالى.• بدراسة تأثير كواشف المجموعات الفعالة للإنزيم مثل ن-إيثيل ميليميد (كاشف لمجموعة السلفا هيدريل) وداى إيثيل بيروكربونات (كاشف لمجموعة الهستيديل) والبيوتانديون (كاشف لمجموعة الأرجينيل) ون-أستيل إيمادايزول (كاشف لمجموعة التيروزيل) وكلوريد الدنسايل (كاشف لمجموعة الليسيل) وتبين أن كل هذه المركبات كانت مثبطة للنشاط الإنزيمى بدرجات متفاوتة وهذا التثبيط أوحى بأهمية هذه المجموعات في تحفيز اليوريكيز وكانت قيم IC50هى 6.2 و4.98 و8.37 و5.41 و5.23 مللى مول على التوالى.•تم تقييد الإنزيم على ألجينات الكالسيوم والكيتوزان وأظهرت النتائج أن كل من الدعامتين مناسبة لتقييد الإنزيم. وأظهر ألجينات الكالسيوم أعلى كفاءة في تقييد الإنزيم والتى بلغت %91.7 والكيوزان 69.8%.•بدراسة تأثيرتركيزات مختلفة الجلوتارألدهيد علي كفاءة التثبيت لليوريكيز تبين أن التركيز الأمثل هو 8 %(v/v).• بدراسة تأثير زمن التثبيت للإنزيم على ألجينات الكالسيوم تبين أن الفترة الزمنية الأمثل لكفاءة تثبيت الإنزيم كانت 5 ساعات•تم دراسة تأثير الرقم الهيدروجينى ودرجة الحرارة على الإنزيم المقيد وتبين أن الرقم الهيدروجينى الامثل هو 9 ودرجة الحرارة المثلى هى 50 درجة مئوية.• أظهرت النتائج أنه من الممكن استخدام اليوريكيز خلال 7 دورات متتالية مع الاحتفاظ بنشاط ملحوظ خلال الدورات السبع.•تشير النتائج السابقة إلى أن إنزيم اليوريكيز هو إنزيم يمكن استخدامه لقياس حمض اليوريك في الاختبارات المعملية للاستدلال على مرض النقرس وأمراض أخرى ويمكن استخدامه أيضا في بعض الصناعات الدوائية.”